一、標本
根據不同疾病采取不同的標本。如傷口的膿液，咽喉、鼻腔等病灶的棉拭，敗血癥時取血液等。檢測抗體時取血清。直接涂片鏡檢 膿液標本可直接涂片，革蘭染色后鏡檢。膿液標本鏡下觀察時，細菌常呈雙或以單個形式存在，而不是呈典型的鏈狀。
二、培養
懷疑鏈球菌感染的標本應在血瓊脂平板上培養。培養基中加入10% CO2，常有助于形成典型的溶血現象。A族乙型溶血性鏈球菌在血平皿上數小時或數天后形成菌落。
三、抗原的檢測
已有快速檢測A族鏈球菌抗原的試劑盒。采用酶或化學方法從咽拭子中提取鏈球菌抗原后用酶免疫技術或凝集試驗的方法測定細菌抗原。與細菌培養方法相比，此法更快捷。
四、血清學試驗
1、抗鏈球菌溶血素O試驗（ASO test） 簡稱抗O試驗，常用于風濕熱的輔助診斷。風濕熱患者血清中的ASO比正常人顯著增高，大多在250單位以上。活動性患者抗體一般超過400單位。
2、抗鏈球菌DNA酶及透明質酸酶試驗（anti-dnase and anti-hyaluronidase test） 主要用于鏈球菌引起的皮膚感染。
3、Dick試驗（Dick test） 是一種皮內試驗。注射0.1ml含有1個皮膚試驗量的鏈球菌紅疹毒素于受試者一側前臂皮內，6～24小時出現直徑大于1cm紅斑者為陽性反應，表明機體對猩紅熱無免疫力。注射局部無反應或紅斑小于1cm者為陰性反應，說明機體對猩紅熱有免疫力。若早期Dick試驗結果陽性，恢復后轉為陰性，可作為猩紅熱的診斷依據。