B淋巴細胞膜表面免疫球蛋白的檢查實驗_直接免疫熒光法

ICR 小鼠

異硫氰酸熒光素（FITC）標記的兔抗小鼠Ig 抗體Hank's液

臺式離心機離心管吸管移液管

1.  采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目鋼網研磨，混勻。從中吸取1 ml細胞懸液放入一試管中，加滿Hank's液，離心1000 rpm，10 分鐘，洗滌細胞一遍。傾去上清，沉積的細胞恢復1 ml容積，即為約1x10⁷/ml的細胞懸液。另取一支試管，吸取1x10⁷/ml的細胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即為1x10⁶/ml的細胞懸液。
 

2.  取2 ml離心管兩只，各加入1x10⁶ /ml的細胞懸液1 ml，用臺式離心機離心2000 rpm，3 分鐘，棄去上清液。一支加入熒光素標記的兔抗鼠Ig抗體100 ul，另一支不加抗體作對照，置4 ℃冰箱30 分鐘。
 

3.  取出離心管，用Hank's 液洗滌細胞兩次，以去除游離的抗體，最后一次離心后棄去上清液，留少許回流液，混勻，滴片，用熒光顯微鏡觀察。

一、在滴片前要徹底去除游離的抗體，以避免假陽性結果。

實驗結果
 

熒光顯微鏡觀察，落射激發光下SmIg 陽性細胞可見環狀或斑點狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計數同一視野內淋巴細胞總數，共計數200～300 個淋巴細胞，算出其中SmIg 陽性細胞的百分數。