CTAB 法 ①取0. 2g 各中藥材樣品分別用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化鋁( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍預熱的緩沖液C 于56 ℃溫育30 min , 離心, 取上清液加入等體積氯仿- 異戊醇(24∶1) 抽提(室溫, 不能低于15 ℃, 否則CTAB 會沉淀) , 10 000g 離心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍體積緩沖液D , 于室溫下放置15 min , 再用等體積氯仿- 異戊醇(24∶1) 抽提1 次。④上清液加入緩沖液C 于室溫下放置6h (或過夜) 。⑤12 000g 離心25 min , 吸去上清液, 用70 %乙醇洗沉淀兩次, 加入150μL 緩沖液E , 存于4 ℃備用。
緩沖液C (50 mmol·L - 1 Tris - HCl , pH
8. 0 , 10 mmol·L - 1 EDTA , 0. 7mol·L - 1NaCl ,
1 %β- 巰基乙醇, 1 %CTA
。
緩沖液D (10 % CTAB , 0. 7mol·L - 1Na2
Cl) 。
緩沖液E (10 mmol·L - 1 Tris , 1 mmol·
L - 1EDTA. pH 8. 0 ) 。