5. 前緣DAGLa缺失增加了BLA-plPFC突觸強度和焦慮樣行為
到目前為止，數據表明，2-AG在限制從BLA到plPFC的興奮性輸入方面起著至關重要的作用，應激暴露以一種電路特異性的方式損害了這一信號的有效性，有助于應激后突觸的加強。這些數據表明，plPFC內的2-AG信號缺失可能通過增強應激后的BLA-plPFC谷氨酸能偶聯而導致焦慮樣行為的產生。為了從實驗上解決這一假設，研究人員利用了有條件的DAGLa基因敲除小鼠。研究人員首先證明了在DAGLaf/f小鼠的plPFC內立體定向注射AAV-Cre可導致plPFC中DAGLa蛋白的選擇性減少，但不能導致相鄰的邊緣下PFC(IlPFC)中DAGLa蛋白的選擇性減少(圖5A)。使用plPFC特異性的DAGLa基因敲除結合上述向BLA注射ChR2和rAAV2-TD-Tomato，研究人員發現BLA-plPFC谷氨酸能突觸的DSE顯著受損，PPR顯著下降，這概括了應激暴露后觀察到的突觸表型(圖5B-5D)。與這種應激樣突觸表型相一致的是，plPFC特異性DAGLa缺失引起了類似于應激暴露后觀察到的引起焦慮的行為表型(圖5e)。這一行為特征在暴露于壓力后持續存在，在另一組小鼠中進行了檢測，表明plPFC 2-AG信號在調節類似焦慮的行為方面發揮了關鍵作用(圖5F)。這些數據表明，受損的plPFC 2-AG信號導致BLA-plPFC谷氨酸能突觸出現應激樣突觸表型，足以誘導焦慮樣行為，概括了應激暴露的影響(圖5G)。綜上所述，研究人員的數據支持這一假設，即BLA-plPFC突觸2-AG信號的應激誘導損傷可能是將應激效應轉化為焦慮樣行為的重要機制。
6. 腦環路特異性CB1缺失增加突觸強度和應激誘導的焦慮樣行為
為了進一步鞏固2-AG-CB1信號在BLA-plPFC突觸調控應激誘導焦慮中的作用，研究人員利用內含子重組酶位點啟用組合靶向(INTRSECT)的方法，選擇性地從投射到plPFC的BLA神經元中刪除CB1受體。使用Cnr1的外顯子2被loxP位點包圍的小鼠(CB1f/f；圖S6A-S6E)，研究人員將驅動FLP重組酶和TD-番茄表達的逆行病毒注射到plPFC中，并將驅動Cre重組酶以FLP依賴的方式表達的病毒注射到BLA中。 將這兩種病毒注射到CB1f/f小鼠體內，可以預測到特異性地從plPFC投射的BLA神經元中刪除CB1受體(圖6A和6E)。使用電生理方法，研究人員首先證明了這種方法可以幾乎完全從投射到plPFC的BLA神經元中去除CB1，因為與注射相同病毒組合的野生型小鼠相比，oEPSCs對大麻素激動劑CP55，940完全不敏感(圖6B)。 在BLA-plPFC特異性CB1缺失后，通過展示BLA-plPFC特異性CB1缺失后BLA-伏核突觸上完整的大麻素受體功能，驗證了該操作的電路選擇性(圖S6F-S6H)。與plPFC DAGLa缺失類似，研究人員發現BLA-plPFC特異性CB1缺失導致的突觸表型與應激后觀察到的類似，表現為PPR降低和DSE幅度降低(圖6C和6D)。接下來，研究人員確定了BLAplPFC特異性CB1缺失在基線和壓力暴露后的行為后果(圖6E和6F)。在壓力暴露之前，與對照病毒(BLA中的plPFC rAAV-td-Tomato與fDIO-Cre-mNeonGreen結合)注射的CB1f/f窩產仔相比，BLAplPFC特異性CB1缺失并不影響EZM中的焦慮樣行為(圖6G)。 然而，在同一組小鼠的EPM中，從BLA-plPFC途徑缺失CB1在足擊應激暴露24小時后增加了焦慮樣行為，這表明CB1群體在調節應激誘導的焦慮樣行為中起著關鍵作用(圖6H)。總之，這些數據支持研究人員的假設，即應激誘導的BLA-plPFC電路的加強是由2-AG-CB1信號中的電路特異性損傷介導的(圖6I)。
參考文獻:
1. David J. Marcus, Gaurav Bedse, Andrew D. Gaulden, James D. Ryan, Veronika Kondev, Nathan D. Winters, Luis E. Rosas-Vidal, Megan Altemus, Ken Mackie, Francis S. Lee, Eric Delpire, Sachin Patel. Endocannabinoid Signaling Collapse Mediates Stress-Induced Amygdalo-Cortical Strengthening. Neuron, 2020; DOI:10.1016/j.neuron.2019.12.024