實驗方法原理
勞克堅牢藍(LuxolFastBlue,LFB)屬于銅-酞箐染料,在酒精溶液中具有與髓鞘磷脂結合的染色特性。應用LFB髓鞘染色可以很好地顯示出神經組織的髓鞘結構。
實驗材料 髓鞘
試劑、試劑盒 LFB溶液0.05%碳酸鋰溶液0.25%焦油紫溶液
儀器、耗材 濾器
實驗步驟
(1)切片經蒸餾水清洗后,入0.1% LFB溶液,于60℃密封浸染8-16h。
(2)經蒸餾水清洗后,入95%酒精。
(3)以0.05%碳酸鋰水溶液分色10s以上。
(4)經70%酒精繼續分色,直至顯微鏡下觀察灰、白質區分清晰為止。
(5) 蒸餾水洗片后,用0.25%焦油紫溶液加數滴冰醋酸染液復染10min。
(6)70%酒精將復染顏色分至細胞核及尼氏體呈紅色。
(7)濾紙沾盡多余液體,入正丁醇2次漂洗脫水,每次脫水時間3-5min。
(8)二甲苯透明,中性樹膠封片。髓鞘呈鮮藍色,核呈深藍色
注意事項
(1)切片若為石蠟切片,要在二甲苯中先脫蠟,再至無水乙醇。
(2)0.05%碳酸鋰水溶液分色應該在顯微鏡下進行,至背景呈灰色為止。70%酒精再次分色時,至背景無色為止。
其他
(1)LFB染色完后,可用焦油紫溶液或蘇木素-伊紅復染,這樣能更好地顯示出細胞的形態。
(2)復染之后要入正丁醇漂洗脫水,這樣染色效果更佳。
溶液配制:勞克堅牢藍1g,95%酒精100ml,10%冰醋酸0.5ml。混勻后過濾,室溫保存。