M15化學感受態細胞操作方法看似簡單,細節很重要

　M15化學感受態細胞是采用大腸桿菌M15菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。它能表達lac阻遏蛋白，抑制T5強啟動子的表達。同時，pREP4還

　　賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來的，含有p15A復制子。它能夠與所有帶ColE1復制起點的質粒共存。

　　主要特點

　　使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-80℃保存幾個月轉化效率不發生改變。

　　recA1和endA1突變阻止對克隆DNA的修飾或對宿主菌染色DNA的重組，提高純化

　　質粒的產量和質量。

　　M15化學感受態細胞操作方法

　　1、取100μl冰上融化的M15感受態細胞，加入目的DNA并用指尖輕輕敲打管底混勻(避免用槍吸打)，冰上靜置25分鐘。

　　2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

　　3、向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

　　4、5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

　　5、將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

　　M15感受態細胞感受態細胞使用注意事項

　　1、感受態細胞一般在冰上融化。

　　2、混入目的DNA時應輕柔操作。