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    發布時間:2022-11-25 11:20 原文鏈接: SDSPAGE檢測蛋白質分子量的基本原理

    蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移取決于它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。在聚丙烯酰胺系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(SDS),大多數蛋白質能與SDS按一定比例結合,即每克蛋白質結合1.4g的SDS-復合物都帶上相同密度的負電荷,它的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量,因而消除了蛋白質原有的電荷差別,使蛋白質分子電泳的遷移率主要取決于本身的分子量,而與蛋白質所帶的電荷無關,在一定條件下,蛋白質的分子量的對數與電泳遷移率間呈負相關。
    操作步驟
    1、凝膠制備:
    用兩塊電泳玻璃板制成垂直板槽(不能漏膠),垂直放置.將配制好的分離膠溶液倒入,滴加入無離子水,待凝膠聚集后,倒出無離子水,用吸水紙吸干,倒入濃縮膠,再插入梳子.
    2、上樣:
    分別取樣品若干ml于離心管中,按1/1~1/5比例加入5×樣品緩沖液,再沸水浴中加熱3~5min,取出待用.用微量注射器分別吸取不超過30μl不同濃度的標準蛋白樣品和試驗樣品注入樣品槽.點樣結束后,調節電泳儀電流到10mA(2~3mA/em),保持電流穩定不變,當溴酚藍遷移到離分離膠底1~2cm時,即可停止電泳.
    3、染色:
    電泳完畢后,取出凝膠板,浸入染色液中,在37℃溫箱中保溫過夜.倒掉染色液,24h后,即可看到清晰的蛋白質條帶.

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