做Western Blot 化學發光（ECL）實驗經常會有“淬滅”的情況發生，經常有朋友反映，加發光試劑后立刻可以看到很明顯的亮光，可亮光很快就消逝了，壓完片后，條帶卻很弱，甚至什么也沒有。這種情況發生的原因是什么？
要解釋這種情況發生的原因，必須先了解ECL化學發光的原理。一般的發光試劑含魯米諾和H2O2、發光增強劑等物質。發光試劑中的魯米諾被HRP和H2O2氧化，產生熒光，這個過程被發光增強劑加強，增強劑在HRP-魯米諾-H2O2體系中扮演著核心角色，決定著ECL化學發光的發展。理想的發光增強劑是：1.發光靈敏，目前一般的發光增強劑都可以將發光靈敏度提高1000倍至100000倍以上，可以檢測pmol甚至fmol級別的HRP，
發光的靈敏度實際上已不是問題。2.發光穩定，這是目前研究的重點之一，發光不穩定的增強劑，容易在一些情況下發生“淬滅”，即快速消耗發光試劑，在幾秒
鐘內發強光，又在幾秒鐘內迅速消逝，不容易被檢測的現象。3.本底或背景低，這是發展的方向之一，由于化學發光反應對增高本底的因素很敏感，因此，化學發
光分析欲得到準確可靠的結果，就必須確保試劑的特異性，在無HRP或很少HRP的情況下，不發光或很少發光。
所以，Western Blot“淬滅”的原因主要在兩方面：含HRP的抗體和發光試劑。由于長期應用某種發光試劑，人們多注意了抗體，不知道發光試劑其實也會對實驗結果造成重大影響。對抗體方面來說，可以采用適當降低抗體的濃度，發光實驗時快速操作來解決“淬滅”的問題；對發光試劑來說，可以選用發光穩定的發光試劑來解決“淬滅”的問題。