洪國藩院士升級PCR技術，發明成果已授權
聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction ,縮寫為PCR）是上世紀80年代中期發展起來的一項體外核酸擴增技術，它可以將目標基因片段于數小時內擴增百萬至數億倍，成為當今生命科學研究最為重要且廣泛使用的技術手段之一。PCR技術是生命科學領域中的一項革命性創舉和里程碑，其發明人穆里斯（K. Mullis）博士因此項發明獲得1993年諾貝爾化學獎。但是PCR技術的自身缺陷也制約了其在醫學臨床診斷上的應用，主要表現在堿基錯配及非特異性擴增等問題上，而如何利用PCR技術獲得目的基因片段的精確擴增是拓展其應用的關鍵和難點所在。 中科院上海生科院生化與細胞所洪國藩院士經過長期DNA基礎理論的潛心研究，成功研發出了低溫封閉多級PCR（Lcn-PCR）技術，克服了普通PCR技術的自身缺陷，同時具有超高的靈敏度和準確性，并能排除環境的交叉污染。洪國藩研究組歷時10多年利用該項技術對數千病例的病原體感染進行了臨床平行對照檢......閱讀全文
反向聚合酶鏈反應技術
我們描述一種大聚合酶鏈反應(PCR)應用的方法，使在已知序列的核心區邊側的未知 DNA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的DNA，以產生適合于PCR擴 增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區 的末端序列，但其方向性，使鏈的延長經過環上的未知區而不是
聚合酶鏈反應的過程
標準的PCR過程分為三步：DNA變性：（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA退火：（60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′
逆轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR，rtpcr）注意事項
注意事項1．在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂；?2． 為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照；?3．內參的設定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白）等。其目的在于避免
聚合酶鏈反應的反應特點
特異性強PCR反應的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結合；②堿基配對原則；③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應中模
聚合酶鏈反應構建重組DNA
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE無水乙醇DNA聚合酶CTP儀器、耗材 電泳儀離心機PCR儀實驗步驟 1. ?制備模板DNA，如DNA不是經氯化銫梯度純化的，100℃煮沸10 min 以滅活核酸酶。?2. ?制備寡核苷酸引物，若PCR產物要進行平端克隆，就應該對引物的5’端羥基進行磷酸化處理。?圖一
聚合酶鏈反應的控制方式
PCR反應的緩沖液 提供合適的酸堿度與某些離子鎂離子濃度 總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L底物濃度 dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/LTaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）引物 濃度一般為0.1 ～ 0.5umol/L反應溫度和循環次數變性溫度和時間 95℃，3
核酸擴增—普通聚合酶鏈反應
把DNA分子變性后解鏈，兩條單鏈DNA分別經復性與兩條引物互補結合，在4種dNTP存在和合適的條件下，由DNA聚合酶催化引物由5'到3'擴增延長，每經過變性、復性、延伸一個循環，模板DNA增加1倍，新合成的DNA鏈又可作為下一個循環的模板，經過30-50個循環，可使原DNA量增加
反向聚合酶鏈反應的定義
中文名稱反向聚合酶鏈反應英文名稱inverse PCR;iPCR定 義用于擴增已知序列的DNA旁側未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上沒有識別位點的限制內切酶，切出包含已知DNA、而兩端帶有未知序列的區段，將切出的DNA區段環化，然后再按已知的DNA序列設計一對引物進行擴增。應用學科細胞生物學
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得
聚合酶鏈反應的基本步驟
主要分為三大步驟:高溫變性、低溫退火、適溫延伸。分別添加引物、模板、Taq酶、dNTP和緩沖液等反應物混合,在約為95℃環境下,雙鏈DNA氫鍵斷裂解旋為單鏈;單鏈與人工設計的引物在約為60℃溫度下,按照堿基互補配對的原則相結合;并升溫到72℃左右,利用Taq酶延伸合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保
關于聚合酶鏈反應的概述
PCR技術是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。 它具有特異、敏感、產率高、 快速、 簡便、重復性好、易自動化等突出優點。 PCR技術最早由美國Cetus公司人類遺傳研究室Kary Mullis及同事于1985年發現并研制成功的；最早的應用報道是Saiki等1985年將PCR技術應用于β-
聚合酶鏈反應克隆的原理
中文名稱聚合酶鏈反應克隆英文名稱PCR cloning定 義應用聚合酶鏈反應的技術獲得DNA分子克隆的方法。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
何謂巢式聚合酶鏈反應？
巢式聚合酶鏈反應(nested polymearse chain reaction, nPCR)也稱套式PCR。在這種技術中，首先用一對外引物進行第1輪PCR，然后再使用第1對引物擴增的DNA序列內部的一對引物再次擴增，所以稱為巢式PCR。由于使用了兩對引物并且進行了兩輪擴增反應，因此試驗的
聚合酶鏈反應的污染來源
1、標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染；有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染：主要是由于在PCR
聚合酶鏈反應構建重組DNA
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用聚合酶鏈式反應（PCR），任何兩個DNA片段可連接成一個新的重組DNA分子。通過在PCR引物中引入的額外非同源的核苷酸，可在連接處
定量聚合酶鏈反應的定義
中文名稱定量聚合酶鏈反應英文名稱quantitative PCR;qPCR定 義將某種已知含量的DNA模板作為內標準進行PCR反應，對待測模板進行定量分析的方法。更靈敏的定量PCR是采用實時PCR方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
逆轉錄聚合酶鏈反應
逆轉錄-聚合酶鏈反應 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得
聚合酶鏈反應構建重組DNA
2016年09月12日 15:27 ? 來源:上海江林生物科技有限公司>>進入該公司展臺?實驗材料DNA試劑、試劑盒TE無水乙醇DNA聚合酶CTP儀器、耗材電泳儀離心機PCR儀實驗步驟1. ?制備模板DNA，如DNA不是經氯化銫梯度純化的，100℃煮沸10 min 以滅活核酸酶。?2. ?制備寡核苷
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析－(PCRSSCP)
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年來發展起來的一種基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序為：
反轉錄聚合酶鏈反應（RTPCR）方法中常見的污染問題...
反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法中常見的污染問題及對策反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析－(PCRSSCP)
??聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年來發展起來的一種基因分析方法。?? PCR-SSCP分析的基本
革命性傳感器PixelSensor在聚合酶鏈反應－(PCR)－中的應用
概述近幾年來，在檢驗醫學和臨床領域，point-of-care-testing (POCT) 成為一個比較熱門的詞匯。它最早出現在美國，意思是在發病或者發生事件的地點進行診斷、監控和治療，能快速地獲得檢驗結果并及時做出正確的處理。POCT的發展使得緊湊型光學和檢測技術的需求不斷增
北京市聚合酶鏈反應（PCR）檢驗實驗室檢查指南（2024版）
京藥監發〔2024〕261號 各區市場監管局，房山區燕山市場監管分局，市市場監管局機場分局，經開區商務金融局，市藥監局各分局，各相關事業單位： 為深入貫徹落實醫療器械生產監管相關法規要求，進一步規范北京市醫療器械生產監督檢查工作，持續強化醫療器械生產科學監管，市藥監局組織對《聚合酶鏈反應（PCR
聚合酶鏈反應的循環參數介紹
預變性模板DNA完全變性與PCR酶的完全激活對PCR能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。?[5]?變性步驟循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列完全變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹底，易造成擴增失敗
定量聚合酶鏈反應的應用特點
中文名稱定量聚合酶鏈反應英文名稱quantitative PCR;qPCR定 義將某種已知含量的DNA模板作為內標準進行PCR反應，對待測模板進行定量分析的方法。更靈敏的定量PCR是采用實時PCR方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
聚合酶鏈反應的用途和特性
PCR反應擴增出了高的拷貝數，下一步檢測就成了關鍵。熒光素（溴化乙錠，EB）染色凝膠電泳是最常用的檢測手段。電泳法檢測特異性是不太高的，因此引物兩聚體等非特異性的雜交體很容易引起誤判。但因為其簡捷易行，成為了主流檢測方法。近年來以熒光探針為代表的檢測方法，有逐漸取代電泳法的趨勢。
聚合酶鏈反應的電泳分析
在實際工作中常采用瓊脂糖凝膠電泳。一般情況下先在電泳緩沖液或凝膠中加1%溴化乙錠（EB）（每100ml加100μl），然后將已經制備好的1%～2%瓊脂糖凝膠（用電泳緩沖液配制）放入電泳槽內，加入待測樣品10μl，同時用分子量標準品作標記。瓊脂糖濃度應按分離DNA片段的大小進行選擇，一般用1.5%
聚合酶鏈反應的模板的制備
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依據PCR的擴增對象，可以是病原體標本如病毒、細菌、真菌等。也可以是病理生理標本如細胞、血液、羊水細胞等。法醫學標本有血斑、精斑、毛發等。標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難以破碎的細菌
聚合酶鏈反應的常規應用介紹
用于治療感染性疾病，腫瘤及遺傳病。感染性疾病PCR在醫學檢驗學中最有價值的應用領域就是對感染性疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。一般實驗室也能檢出10~100基因拷貝，而目前病原體抗原檢測方法一般需要105-7個病原體才可檢測到。PCR對病原體的檢測解決了免疫學檢測的
聚合酶鏈反應的引物設計原則
PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以信息鏈為基準），5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。（1）引物設計的基本原則引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。引物堿基：G+