武漢植物園植物資源可持續利用中心召開學術交流會
10月21日下午，武漢植物園植物資源可持續利用中心在2號會議室召開了2011年度學術交流會。交流會由中心主任彭俊華研究員主持，所屬學科組部分組長及研究生共50余人參加了會議。 交流會上，來自植物資源可持續利用中心各學科組的科研人員為大家作了題為“三萜抗癌化合物合成途徑關鍵酶基因的挖掘（天然藥物生物合成學學科組黎佳）”、Anthocyanin Biosynthesis in Peach Leaf (Prunus persica f. atropurpurea)（果樹分子育種學學科組周瑩）、“能源植物中國芒研究”（植物應用基因組學學科組趙華）、“兩株產油微藻分批培養過程中細胞密度、干重及總脂含量變化（植物生物技術學科組梅洪）”、“人工馴化對葡萄中糖代謝相關基因的影響（園藝作物生物學學科組辛海平）”和Biosynthesis and Regulation of Bioactive Compounds in Ep......閱讀全文
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
基因工程的載體和工具酶1
第一節載體引言基因克隆的本質是使目的基因在特定的條件下得到擴增和表達，而目的基因本身無法進行復制和表達、不易進入受體細胞、不能穩定維持，所以就必須借助于“載體”及其“寄主細胞”來實現。作為基因克隆的載體必須具備以下特性：⑴載體必須是復制子。⑵具有合適的篩選標記，便于重組子的篩選。⑶具備多克隆位點（M
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
基因工程的載體和工具酶2
2、pUC質粒載體1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技術在pBR322基礎上構建的。結構：（1）來自于pBR322的Ori（2）氨芐青霉素的抗性基因(ampr)。但核苷酸序列發生了變化（3） LacZ′基因編碼β—半乳糖酶的α—肽鏈即氨基末端。（4）MCS區段是一段用于插入外
查爾酮合成酶基因的克隆
一、實驗目的與意義 學習PCR操作技術，利用基因全長引物，擴增出查爾酮合成酶基因的全長，使學生掌握PCR的基本原理和操作。 二、實驗原理 聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是上世紀80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、
雙熒光素酶報告基因檢測（二）
雙熒光素酶報告基因檢測（二）雙熒光素酶實驗通常被用來評估miRNA是否與其潛在的靶基因發生相互作用。實驗中，預測的miRNA靶標基因的3’-UTR序列被克隆到含有螢火蟲熒光素酶的報告基因載體的3’-UTR位置。如果miRNA與插入到質粒中的目標序列發生結合，miRNA將通過抑制該序列的翻譯來降低螢火
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
酶標抗體法—轉基因檢測的介紹
檢測轉基因物質的雙抗體夾心ELISA具備多克隆抗體費用較低。單克隆抗體親和力高的特點，使得后續研究開發的試劑盒檢測成本低廉，靈敏可靠，而且可以穩定、方便地提供標準化試劑，便于實現工業化生產。雙抗體夾心ELISA檢測方法的研究和建立，為制備免疫膠體金試紙條提供了便利，為建立轉基因動物的現場、快速查
熒光素酶報告基因的技術流程
啟動子的預測轉錄因子的預測報告基因質粒的構建實驗方法及結果分析?用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。擴增轉錄因子質
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
關于轉座酶基因的作用的介紹
在基因組進化過程中，轉座酶基因的作用在許多方面起作用。最明顯的效應是轉座子能夠啟動重組，最后導致基因組重排。這種作用與這些轉座因子的轉座活性無關，而只是由于染色體上有某一轉座因子的幾份拷貝，于是在同一染色體或不同染色體上有著相同轉座因子序列的部位之間發生重組。重組的結果可能會缺失若干個有重要功能
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒
雙重熒光素酶報告基因優缺點
雙重熒光素酶報告基因優點是具有靈敏度高，缺點是需要多次實驗。雙熒光素酶報告基因檢測系統因其具有靈敏度高、無細胞內源性表達干擾等優勢，現已被廣泛用于基因表達調控的研究中，同批次樣品檢測值也可能出現浮動。所以實驗一般需要做3個或3個以上復孔，并且引入另一個報告基因作為內參。雙熒光素酶報告基因檢測是以熒光
基因工程的載體和工具酶4
與II型核酸內切酶有關的幾個概念粘性末端：cohesive ends是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互補堿基的單鏈延伸末端結構，它們能夠通過互補堿基間的配對而重新環化起來。平 末 端 ：Blunt end在識別序列對稱處同時切開DNA分子兩條鏈，產生的平齊末端結構。則不易于重新環化。同裂酶
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
基因工程的載體和工具酶5
（二）Klenow片段酶Klenow片段是大腸桿菌聚合酶 I 全酶經枯草桿菌蛋白酶處理后產生的大片段酶分子，分子量為76KD 。酶催活性：⑴5’ →3’ 的聚合酶活性 ⑵3’→5’ 的核酸外切酶活性Klenow片段的主要用途（利用5’ →3’ 的聚合酶活性）：⑴修補限制性酶消化DNA形成的3
雙熒光素酶報告基因實驗原理
雙熒光素酶報告基因實驗原理具體如下：雙熒光素酶報告基因實驗原理是利用雙熒光素酶作為熒光素酶的標記來研究基因表達與調控的機制。雙熒光素酶報告基因實驗是一種基因表達定量分析技術，通過將雙熒光素酶Luciferase作為報告基因插入到需要研究的靶基因啟動子區域或轉錄后區域，使其與靶基因協同表達。當熒光素基
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
基因工程的載體和工具酶3
2.M13噬菌體載體的構建 ? ⑴ 在IS區內插入LacZ基因 ⑵在標記基因區內組裝MCS區段 所以能通過a互補在X-Gal/ IPTG平板上識別重組體。這類載體包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等 這類載體的突出優點在于其既可以提供單鏈DNA，也可以提供雙鏈的D
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
雙熒光素酶報告基因檢測（三）
雙熒光素酶報告基因檢測（三）螢火蟲熒光素酶片段互補成像（LCI）技術是一種新興的蛋白質相互作用研究方法，其中兩個被研究的目標蛋白質分別與螢火蟲熒光素酶的N端和C端相連。當這兩個蛋白質發生相互作用時，熒光素酶的兩個段落會接近并組合成一個活性酶。結合煙草瞬時表達系統的LCI技術，能夠在植物細胞內進行實時
概述β半乳糖苷酶基因在基因工程中的應用
β-半乳糖苷酶基因被廣泛地應用于包括作為報告基因、構建載體、轉基因研究和基因治療等多個分子生物學研究領域。具體介紹如下： 1、在載體構建中的應用 β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，產物呈藍色，易于檢測和觀察，基于這一特點，β-半乳糖苷酶基因常
β半乳糖苷酶基因在基因工程中的應用介紹
β-半乳糖苷酶基因在基因工程中的應用：β-半乳糖苷酶基因被廣泛地應用于包括作為報告基因、構建載體、轉基因研究和基因治療等多個分子生物學研究領域。具體介紹如下：1在載體構建中的應用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，產物呈藍色，易于檢測和觀察，基于這一特
簡述轉座酶基因遺傳標記的研究
轉座酶基因遺傳標記的研究的目的是為了了解常州地區新生兒呼吸道分離到的肺炎鏈球菌（Sp）接合型轉座子存在狀況。方法采用PCR擴增技術對新生兒病房分離到47株Sp菌進行轉座酶基因遺傳標記——i班Tn916/Tn1545轉座酶基因檢測。結果47株Sp菌中39株（83．0%）攜帶intTn916型或/和
關于米曲霉蛋白酶的基因分析介紹
相同培養條件下的不同米曲霉菌株之間進行了比較基因組學和蛋白質組學的研究，分析醬油發酵過程中米曲霉的關鍵基因和蛋白對醬油風味產生的影響。通過米曲霉3.042(中國卿米曲霉RIB40(日本)菌株的基因姐學比較，發現與醬油風味物質形成相關的特異基因。圍繞米曲霉3.042及其誘變菌株米曲霉100-8的蛋
基因診斷的聚合酶鏈反應方法介紹
21世紀，基因分析和基因工程技術有了革命性的突破，這主要歸功于聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）的發展和應用。應用PCR技術可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小時內體外擴增數十萬至百萬倍。擴增的片段可以直接通過電泳觀察，也可用于進一步的分析。這樣，