桿狀病毒儲液制備實驗——從懸浮培養中制備
實驗材料懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1. 用 50 ml TNM-FH /10％ FBS 培養液在 500 ml 旋轉培養瓶中培養 Sf 9 細胞，直到細胞密度達到約 1 × 105 細胞/ml（見昆蟲細胞保存培養實驗）。2. 室溫下以 1000 g 離心 10 min 回收細胞，棄去上清。加入 10～20 ml 新鮮的 TNM- FH/10％ FBS 培養液重懸細胞團塊。加入感染復數（MOI）為 0.1～0.5 的病毒接種（見步驟 1.2）。MOI 以 pfu/細胞來表示。感染給定數目細胞的病毒接種物的體積=MOI （pfu/細胞）× [細胞數/毒種儲液的滴度......閱讀全文
概述桿狀病毒表達系統的載體和發展
桿狀病毒基因組十分龐大，不能直接對其進行操作插入外源基因，因此需要通過中間轉染載體而獲得重組桿狀病毒。經過十多年來研究者們的不斷探索，已構建出用于表達不同基因產物的各種轉移載體。這些轉移載體的共同特征是[3]： ①在一個基礎質粒（如pUC系列）中插入一個多角體蛋白基因啟動子（或p10基因啟動子
桿狀病毒入侵及演化機制研究中取得進展
近期，中國科學院武漢病毒研究所研究員王華林領導的學科組在膜融合蛋白介導的桿狀病毒入侵及演化機制研究中取得新進展。相關結果發表在2014年2月的病毒學刊物Journal of Virology上(88:2301-11)。 桿狀病毒的膜融合蛋白在介導病毒入侵細胞的過程中發揮重要作用。通過構
桿狀病毒表達系統的空斑純化法介紹
由于在重組病毒中多角體基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含體，為包含體陰性病毒。包含體陰性病毒與包含體陽性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形態是不同的。因此，可在光學顯微鏡下，利用這一特征篩選出含外源基因的重組病毒并加以純化[12]。這正是目前使用最普遍的有效方法。 1
影響桿狀病毒表達系統的表達因素介紹
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素： ①該目的基因應不含內含子； ②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列； ③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如K
桿狀病毒儲液制備實驗——從懸浮培養中制備
實驗材料懸浮培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1
桿狀病毒衣殼蛋白可以組裝為柔性納米管
近日，中國科學院武漢病毒研究所曹晟課題組在桿狀病毒衣殼蛋白組裝體結構及應用方面取得新進展。研究發現桿狀病毒衣殼蛋白可以在體外條件下可控地組裝為柔性納米管，該納米管具有兩種明顯不同的組裝形式，可以作為納米平臺高密度地展示多種外源蛋白。相關工作在線發表于美國化學會《應用材料與界面》（ACS Appl
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——小規模表達
實驗方法原理分析方案依賴于表達蛋白的天然特性。實驗材料草地夜蛾（Sf9）細胞高滴度的重組桿狀病毒儲液試劑、試劑盒PBS1×SDS樣品緩沖液儀器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆蟲培養基60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱（濕度可選）15 ml 聚丙烯離心管帶有 GH-3.7 水平轉
桿狀病毒儲液制備實驗——從單層培養中制備
實驗材料單層培養的 Sf 9 細胞待接種的桿狀病毒（野生型的或重組）試劑、試劑盒含10％胎牛血清的昆蟲細胞培養液 TNM-FH儀器、耗材150 mm 培養瓶27℃ 培養箱倒置顯微鏡帶有 GH-3.7 水平轉子的4℃GPR離心機帶螺口蓋的凍存管液氮罐500 ml 旋轉細胞培養瓶多轉瓶的攬拌臺實驗步驟1
桿狀病毒儲液制備實驗——噬斑試驗測定滴度
實驗材料對數生長期單層培養的 Sf 9 細胞試劑、試劑盒桿狀病毒儲液昆蟲細胞培養液儀器、耗材瓊脂糖頂層覆蓋物臺盼藍頂層覆蓋物（選用）60 mm 組織培養皿27℃ 培養箱1.5 ml 帶螺口蓋的凍存管實驗步驟1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培養液稀釋處于對數生長期的 Sf 9 細胞至約
重組桿狀病毒的純化實驗——編碼β半乳糖苷酶
桿狀病毒是一類在自然界中專一性感染節肢動物的DNA病毒，可用于（1）作為基因工程病毒殺蟲劑 ,提高害蟲防治效率（2）作為超高效的真核基因表達載體 ,生產有用的工程蛋白（3）研究桿狀病毒基因組的結構與功能（4）研究真核基因表達的調控機制。實驗方法原理由于昆蟲桿狀病毒環狀雙鏈DNA基因組很大 (約 13
研究發現甘蔗桿狀病毒啟動子及其順式作用元件
近日，廣東省科學院南繁種業研究所聯合福建農林大學國家甘蔗工程技術研究中心、法國國際農業研究中心，研究發現受干旱誘導的新型甘蔗桿狀病毒啟動子及其順式作用元件。相關成果在線發表于《通訊生物學》（Communications Biology）。全球氣候變化導致極端天氣頻發，其中干旱是影響作物生長和生產力的
桿狀病毒表達系統的影響蛋白質表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
桿狀病毒表達系統用于表達融合型蛋白的轉染質粒
是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
桿狀病毒表達系統用于表達多個非融合蛋白的轉染載體
這種載體的主要特征是含有2個或2個以上相同的啟動子，可表達2條或2條以上多肽鏈的蛋白。 如Emery和Bishop[8]等構建的pAcVC2轉染質粒，含有兩個方向相反的多角體基因啟動子。重組病毒可同時表達多角體蛋白和淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV） N蛋白。Takehara[9]等構
武漢病毒所桿狀病毒核心基因ha72功能研究取得進展
近期，中科院武漢病毒研究所系統病毒學研究組在桿狀病毒ODV特異性囊膜蛋白HA72的功能研究方面取得重要進展。相關結果發表在國際病毒學雜志Journal of Virology上。 桿狀病毒包含37個核心基因，它們在病毒生活史中發揮著重要的作用。其中棉鈴蟲核型多角體病毒(Helicove
對蝦桿狀病毒病（BP）核酸檢測試劑盒使用說明
對蝦桿狀病毒病（BP）核酸檢測試劑盒（一管式恒溫熒光法）◆ 產品說明動物疫病檢測系列基于獨特的恒溫熒光檢測技術，可針對食品、動物組織等樣品中病害的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增曲線判定結果。本產品用于對蝦桿狀病毒病（BP）的檢測，檢出限為103copies/μl基因組DNA。◆ 產品組成（96測
桿狀病毒口服感染因子復合物的組成及裝配機制
2019年1月2日，國際學術期刊《病毒學雜志》（Journal of Virology）在線發表了中國科學院武漢病毒研究所/病毒學國家重點實驗室研究員胡志紅團隊的最新研究成果，論文題為Baculovirus per os Infectivity Factor Complex: Component
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白的代謝標記
實驗方法原理由于重組蛋白表達的時候，宿主蛋白質的合成基本終止，因此體內代謝標記是檢測重組蛋白的敏感方法。所有的標記氨基酸都摻入到晚期病毒特異的蛋白質（包括目的蛋白）的合成。35S 標記的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射標記的氨基酸。為了獲得更好的結果，在標記之前細胞內的這兩種氨基酸應當被清除：將細胞在
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——重組蛋白大規模生產
實驗材料草地夜蛾細胞（Sf 9）高滴度重組病毒儀器、耗材無血清昆蟲細胞培養基1～10 L 旋轉培養瓶10.16 cm 管索張力器多旋轉瓶攬拌臺27℃ 培養箱供氣泵實驗步驟1. 在懸浮培養液中培養 Sf 9 細胞，并使之適應無血清培養液（基本方案 1）。2. 準備旋轉培養瓶，用于按比例擴增 Sf 9
桿狀病毒表達系統用于表達單一非融合蛋白的轉染質粒
由于外加的多角體蛋白或其它的氨基酸可能對外源蛋白的生物活性或細胞定位產生影響，所以用于表達非融合型蛋白的轉移載體被廣泛應用。幾種不同的策略被用于設計高水平表達非融合蛋白的轉移載體： (1)如pAcRP[5]系列等，都在多角體基因啟動子啟始密碼ATG上游引入一個單一的限制性多克隆位點； (2)
武漢病毒所揭示量子點標記病毒應用于活體動物的安全性
桿狀病毒（Baculovirus）及量子點（Quantum dots，QDs）均為非常具有應用前景的生物醫學材料，而用量子點標記的桿狀病毒粒子（bq）則可用于基因治療活體示蹤等方面的研究。考慮到兩者可能在動物體內或臨床上的應用，其安全性亟待評估。 6月18日，生物材料科學雜志Biomateri
中國學者J.－Virol解析桿狀病毒核心基因ha72
近期，中科院武漢病毒研究所系統病毒學研究組在桿狀病毒ODV特異性囊膜蛋白HA72的功能研究方面取得重要進展。相關結果發表在國際病毒學雜志Journal of Virology上。 桿狀病毒包含37個核心基因，它們在病毒生活史中發揮著重要的作用。其中棉鈴蟲核型多角體病毒(Helicove
對蝦桿狀病毒（BP）核酸檢測試劑盒實驗反應五要素原則
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴增跨度： 以200-500bp為
黃頭桿狀病毒PCR檢測試劑盒使用說明書
技術原理：?DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。? ? ? ?在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫
利用納米磁鐵對體內CRISPR/Cas9基因組編輯進行空間控制
在自然界中，CRISPR/Cas9通過記錄入侵者的DNA來增強細菌的免疫防御。這讓細菌能夠識別和攻擊再次到來的相同入侵者，但是科學家們一直在競相改進基因組編輯工具CRISPR/Cas9來修復導致遺傳疾病的突變并在實驗室實驗中操縱DNA。 如果科學家們能夠將這種基因組編輯工具運送到體內正確的細胞
新型DNA修復試劑盒有望用于基因治療
使用一種可能改變游戲規則的DNA修復工具包，在患者提取的腎細胞中修復導致兒童和年輕人衰弱遺傳性腎臟疾病的基因突變。這項由布里斯托爾大學科學家開發的研究成果發表在《Nucleic Acids Research》雜志上。在這項新研究中，這個國際團隊描述了他們如何創造出一種DNA修復工具，從基因上修復有缺
真核細胞表達系統2
在病毒感染晚期，由于大量外源蛋白的表達引起昆蟲細胞的裂解，胞質內的物質釋放出來，與 目的蛋白混在一起，從而使蛋白的純化工作變得很困難，另外水解酶的釋放會降解重組蛋白。為了克服以上這些困難，科學工作者先后嘗試用絲蛾肌動蛋白基因啟動子或桿狀病毒ie-1基因啟動子表達外源蛋白，但效果都不明顯。Farr
新的DNA修復工具包成功修復患者遺傳性疾病
在這項新研究中，國際研究小組描述了他們如何創造出一種DNA修復工具來從基因上修復有缺陷的podocin，這是一種遺傳性類固醇抵抗性腎病綜合征(SRNS)的常見遺傳原因Podocin是一種位于特殊腎臟細胞表面的蛋白質，對腎臟功能至關重要。然而，有缺陷的podocin會滯留在細胞內，永遠無法到達表面，最
桿狀病毒系統蛋白質表達實驗——蛋白質生產高峰期的確定
實驗方法原理因為重組蛋白的表達受多角體啟動子的調節，而多角體啟動子在病毒裂解循環的晚期才被激活，所以重組蛋白在感染后期才表達。重組蛋白通常在感染后 15～24 h之間即可檢測到，并可積累至感染后 40 h 左右，然后積累水平下降。由于不同的蛋白質在昆蟲細胞中有不同的穩定性，推薦用這個系統測定蛋白質積
武漢病毒所病毒雙特異性熒光標記研究取得進展
近日，中科院武漢病毒研究所王漢中領導的研究團隊在利用納米材料標記病毒以用于病毒與宿主細胞相互作用的可視化相關研究中繼續取得研究進展，相關文章發表于生物材料領域的專業期刊Biomaterials上。 病毒的單顆粒標記和示蹤技術為我們揭示病毒和宿主細胞間的相互作用過程提供新的視野和平臺。標記了