雙重PCR實驗
隨著轉基因農作物的大量種植，其安全性問題也日益受到人們的重視。2002年我國要求對轉基因農作物實行標簽管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在傳統大豆株Variety A5403中轉入外源基因CAMV-35S啟動子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS終止子而得到。它是目前使用最廣的轉基因作物之一，每年至少有 800萬噸轉基因大豆進入我國市場。因此，研究抗草甘膦大豆的快速檢測方法具有重要意義。目前采用PCR檢測轉基因大豆的方法大多是采用瓊脂糖凝膠電泳 法，首先檢測CAMV-35S啟動子和NOS終止子進行篩選，然后檢測EPSPS抗草甘膦基因，操作煩瑣、費時。本研究利用雙重PCR技術同時擴增上述基 因片段，用激光誘導熒光-毛細管電泳高效、快速檢測PCR產物，顯著提高了檢測效率，并使靈敏度大為增加。本方法所需樣品量少（nl級），快速、靈敏和準 確，已成功用于實際轉基因大豆......閱讀全文
多元實時－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸餾水 反向引物 正向引物 儀器
多重－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 多重PCR（multiplex PCR），其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同。一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定。重PCR的特點有：①高效性在同一PCR反應管內同時
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
原位PCR實驗相關
所需設備 原位PCR反應是在載玻片的平面上進行，保持水平可以使反應各組分均勻地分布在組織切片上，所以須在原位PCR儀上進行，該儀器不但可以使載玻片保持水平，而且還可以給載玻片進行均勻地加熱，保證擴增反應的順利進行。 探針種類 與原位雜交一樣，檢測原位PCR結果的探針可以是DNA探針，也可以
FDDPCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 cDNA 礦物油 儀器、耗材 熱循環儀 薄壁 PCR 管
PCR實驗技巧3
11. Template DNA preparation?提取DNA時的試劑會抑制PCR反應的順利進行.因此需要對TEMPLATE DNA進行純化.特別是SDS(
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
多重－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 酶和酶緩沖液Taq 聚合酶許多 Taq 聚合酶都可以用；作者發現 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以滿足大多數需要. 如果需要提高PCR 產物的特異性，應該使用熱啟動聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附帶的
PCR實驗技術（二）
【方法】方法一、基本的PCR方法下面介紹的基本PCR方法可作為任何PCR擴增的一般指導和出發點。由于各種PCR反應條件（如PCR擴增次數、溫度、Taq?DNA聚合酶的濃度、引物、氯化鎂以及模板DNA）變異極大，應根據具體情況，對各種PCR反應條件進行相應調整。1．按以下次序，將各成分加入0.2?ml
PCR－擴増實驗
這一方案設計包含 10 個反應還多 10%, 每次奇數循環之后相應地從 PCR 儀中取出樣品，由第 15 個循環起始，到第 35 個循環終止。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒dNTP混合物基因特異的正向引物基因特異的反向引物單鏈cDNATaqDNA聚合酶RT
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
免疫PCR實驗步驟
免疫PCR實驗步驟，主要程序（1） 抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復合物；（2） 加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復合物；（3） 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4） PCR擴增生物素化DNA部分。免疫PCR實驗步驟，實驗步驟（1）制備生物素化DNA將噬粒
PCR實驗技巧1
增加PCR的特異性：?1. prime理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60%?c. 5'端和中間序列要多GC,以增
原位PCR實驗步驟
原位PCR實驗步驟，原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬
多重－PCR－擴增實驗
多重PCR擴增實驗可以用于：（1）在同一PCR反應管內同時檢出多種病原微生物，或對有多個型別的目的基因進行分型，特別是用一滴血就可檢測多種病原體；（2）多重PCR很適宜于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌，戰傷感染細菌及細菌戰劑的同時偵檢；（3）多種病原體在同一反應管內
多元實時－PCR－實驗
多元實時 PCR 時，在一個反應管中加入不同標記的成對引物，從而可以同時分析多個不同的基因。在許多反應中，用 JOE 標記看家基因對模板定量，用 FAM 標記目的基因,證明 LUX 引物非常有效。在標準的多元體系中，使用的引物濃度和加入的體積與進行一元反應時相同，如下。本實驗來源于 PCR 實驗指南
PCR實驗技術（三）
【注意事項】1.?PCR引物設計：引物設計可能是PCR擴增成功最關鍵的因素。如引物設計欠佳，可能導致擴增產物不足，甚至擴增失敗，其原因是設計欠佳的引物可導致非特異擴增和/或形成引物二聚體，此又成為PCR反應的競爭性產物，從而進一步抑制PCR產物形成。在引物設計時必須考慮以下幾個因素，其中最重要的是引
PCR－產物定量實驗
試劑、試劑盒 DNA 標準TEPCR 產物儀器、耗材 熒光計金屬箔紙微量離心管實驗步驟 方法 A: 熒光測定法熒光測定法可以在納克級范圍精確定量。熒光計和 DNA 定量試劑盒許多公司都有出售。確定熒光計是否安裝了適合于特定染料的激發和發射的部件至關重要。該方法在設計上適用于配有帶藍色 LED
FDDPCR－實驗
本方案設計為 24 個 PCR 反應，使用 3 種 cDNA 亞群（利用方案 3 中的 H-T11M 引物進行 RT 反應），引物為熒光染料標記的錨定引物（FH-T11M) 與 24 種上游任意引物 (HAP) 的組合。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒cDN
PCR實驗技巧2
5. touchdown PCR?原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子，ANNEALING TEMP. 55度?94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s?72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min
PCR基因擴增實驗
[實驗目的]通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction,PCR）的原理類似于DNA的天然復制過程。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物，經變性、退火和延伸若干個循環后，DNA擴增2n倍。1．變性：加
PCR－產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
多元實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPrism7700型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以50ul反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen
PCR－產物定量實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 DNA 標準 TE PCR 產物 儀器、耗材 熒光計 金屬箔紙
PCRELISA實驗
實驗概要本實驗介紹了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫學方法檢測PCR產物，這比常規用電泳方法及Southern blot要簡便、省時，可同時處理大量標本，便于自動化。實驗原理PCR-ELISA的原理是在做PCR擴增時應用生物素(biotin)標記的引物，這樣PCR的產物就可結
PCR實驗技術（一）
PCR（聚合酶鏈式反應）【原理】PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種d
PCR實驗技巧4
④引物的額外序列與退火溫度?若有額外的序列信息要加到引物中，例如T7RNA聚合酶結合位點、限制酶切位點或者GC發夾結構可以使用加長的引物。一般說來，引物5'端添加無關序列不會影響引物特異序列的退火。有時候，引物中添加了大量與模板不配對的堿基，可以在較低退火溫度的條件下進行4到5個擴增循環；然
PCR實驗常見問答
常見問答Q-1:?LA PCR的反應條件??A-1:?因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。◇ 循環次數根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25 ~ 30個循環。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。?◇ Anneal以及Extension合適的A
pcr實驗詳細步驟
1、模板的取材主要依據PCR的壙增對象，可以是病原體標本如病毒、也可以是病理生理標本如細胞等。2、標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品霓要經過SDS和蛋白 酶K處理。難以破碎的細菌，可用溶菌酶加EDTA處理。3、引物最好在模板cDNA的保守區內設計，引物長度一般在15~30
PCR－產物定量實驗
測序之前對模板精確定量至關重要。根據 DNA 用量的多少，有幾種不同的方法可供選擇。下面介紹另外兩種方法：熒光測定法和比較溴化物染色法。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒DNA 標準TEPCR 產物儀器、耗材熒光計金屬箔紙微量離心管實驗步驟方法 A: 熒光測定