細胞傳代實驗——細胞培養技術
細胞傳代實驗可用于：（1）醫學研究；（2）提供細胞種。（3）進行細胞生物學研究。實驗方法原理培養細胞傳代根據不同細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。實驗材料細胞試劑、試劑盒D-Hanks液小牛血清RPMI1640雙抗胰蛋白酶EDTANHClNaHCO3儀器、耗材凈化工作臺離心機恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養箱吸管玻璃瓶培養瓶廢液缸吸頭槍頭膠塞離心管量加樣槍紅血球計數板實驗步驟1. 貼壁細胞的消化法傳代：（1）吸除或倒掉瓶內舊培養液。（2）D-Hanks液洗2～3次。 （3）向瓶內加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養瓶，使消化液流遍所有細胞表面。（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加適量新的消化液，輕輕搖動再倒掉大部分消化液，僅留少許進行消化（也可不采用上述步驟......閱讀全文
結締組織類細胞培養實驗——巨噬細胞培養實驗
實驗方法原理巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養，并可進行純化。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活2~3 周，因之多用作初代培養。巨噬細胞也能建成無限細胞系；大多來自小鼠，如P388D-1、J774A.1、RAW
細胞實驗技術及細胞培養基本知識1
細胞培養技術細胞周期的測定一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。 單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。 測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法
細胞實驗技術及細胞培養基本知識2
（二）人類淋巴母細胞建株方法1、4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白細胞層（第二層）于另一離心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。
細胞實驗技術及細胞培養基本知識3
三、神經膠質細胞培養神經細胞（神經元）不易培養，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養，不僅能獲得生長的膠質細胞，也可形成能傳
常規細胞培養方法（原代培養和傳代培養）
原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。儀器、材料及試劑儀器：培養箱（調整至37℃），培養瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血
羊水細胞培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養用以檢驗胎兒核型。 試劑、試劑盒 碘酒 酒精 營養液
羊水細胞培養實驗
實驗方法原理羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養用以檢驗胎兒核型。試劑、試劑盒碘酒酒精營養液血清秋水仙素醋酸甲醇儀器、耗材棉簽棉球鑷子穿針培養瓶實驗步驟1. ?抽取羊水無菌抽取羊水10～20 ml，立即注入無菌離心管中；2. ?離心分離1000 轉/分，離心10 分鐘，去上清，留0.5 ml；
羊水細胞培養實驗
羊水細胞培養實驗實驗方法原理羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養用以檢驗胎兒核型。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒碘酒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?酒精 ? ?
腫瘤細胞培養實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 培養液Hanks胰蛋白酶EDTA膠原酶儀器、耗材 培養瓶離心管實驗步驟 一、成纖維細胞排除法1. ?機械刮除法?是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲），或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序為（1）標記鏡下
腫瘤細胞培養實驗
腫瘤細胞培養實驗 提高腫瘤細胞培養存活率和生長率的實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 腫瘤組織及細胞在模擬體內生長環境的條件下、與一般組織細胞一樣、也能夠生長發育乃
特殊細胞培養實驗
實驗方法原理 二倍體細胞來源體內二倍體細胞，也即正常細胞的初代培養。初代培養細胞成功后能始終保持二倍體細胞性狀，便成為二倍體細胞培養。二倍體細胞雖不難培養，但欲求長期呈旺盛地增殖生長、并保持二倍體細胞性狀，亦非易事。為此必須采取一些有效的措施，一是低溫凍存，二是妥善的培養方法。用反復傳代的方法以求獲
特殊細胞培養實驗
一、二倍體細胞培養法 加支持物培養法 單細胞分離培養法 多孔塑料培養板單細胞克隆法 球體細胞培養實驗 微載體細胞培養法 懸浮培養法 ? ? ? ? ? ?
腫瘤細胞培養實驗
腫瘤細胞培養實驗可用于：（1）研究腫瘤的發生機理；（2）研究生物學行為；（3）研究抗腫瘤藥物。實驗方法原理腫瘤組織及細胞在模擬體內生長環境的條件下、與一般組織細胞一樣、也能夠生長發育乃至繁殖、為研究癌變機理、抗癌藥檢測、腫瘤分子生物學提供大量的實驗材料。實驗材料腫瘤組織試劑、試劑盒培養液Hanks胰
羊水細胞培養實驗
實驗方法原理 羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養用以檢驗胎兒核型。試劑、試劑盒 碘酒酒精營養液血清秋水仙素醋酸甲醇儀器、耗材 棉簽棉球鑷子穿針培養瓶實驗步驟 1. ?抽取羊水無菌抽取羊水10～20 ml，立即注入無菌離心管中；2. ?離心分離1000 轉/分，離心10 分鐘，去上清，留0.5
傳代細胞系的技術要點介紹
1、取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養材料。取材后盡快培養，因故不能立即培養者，可凍存。其培養方法及凍存方法同前述正常組織。 2、成纖維細胞排除：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細胞，培養時能與瘤細
細胞培養技術3
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白為淡黃色粉末，雖易潮解結塊，但不影響使用。 不同批號和牌號質量有差異。水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物，含有豐富的氨基酸。開始時它是專為猴腎細胞培養設計的，而實際上它對許多細胞系(株)，如Hela細胞和原代細胞都是一種優良培養基。使用時用Hanks液配制成0
細胞培養技術1
一.細胞培養的基本原理 細胞培養是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細胞，用培養基制成細胞懸液，在體外適宜條件下，使細胞生長繁殖，并保留其一定的結構和功能特性。細胞培養與組織培養、器官培養主要不同點在于原始培養的對象不同。細胞培養使用的是單個細胞懸液，組織培養使用的是組織塊(0．5～1立方毫米)或薄片
細胞培養技術4
貼壁因子使用方法：①選擇適宜的貼壁因子。②將貼壁因子貯存液用三蒸水或PBS液或D-Hanks液稀釋成0．1毫克/毫升的工作液。③濾過除菌的工作液按50微升/平方厘米涂布培養器皿的細胞生長面。④室溫靜置5分鐘(膠原基質延長24小時)。⑤除去多余溶液。⑥涂布面用滅菌三蒸水洗滌后，再經細胞培養基浸泡過渡，
細胞培養技術2
◇濕熱消毒的注意事項①不可用安全閥摘子排氣。②消毒的過程中若出現漏氣現象，可調節消毒器蓋內的膠墊的位置。③滅菌完畢，不要急于取出消毒品，可利用消毒器的余熱去除物品部分濕氣，待半小時左右再移入干燥箱烘干。2.干熱消毒 這種消毒方法主要用于玻璃器皿消毒，一般溫度在160℃維持90—120分鐘就可以殺死
肌組織細胞培養實驗——心肌細胞培養實驗
實驗方法原理心肌組織是最早利用的培養材料，Carrel曾長期培養過雞胚心肌組織，至今心肌仍不失為好的培養物。最常用的是雞胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎兒心肌等都可應用。心肌是比較容易培養和生長的組織，可應用多種方法進行培養，如懸滴培養、組織塊培養和消化培養法等，主要取心室肌培養，均能獲得良好的生長效果。
肌組織細胞培養實驗——神經組織細胞培養實驗
實驗方法原理神經組織主要由兩種神經細胞（神經元）和神經膠質細胞組成。神經元為高度分化的細胞，在組織發生晚期已失掉增殖能力，對生存條件要求高，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或在加入神經生長因子（NGF）和膠質細胞因子時，才能生存，并可能出現一定程度的分化現象，如長出突起等，但卻難使之增殖；即使
肌組織細胞培養實驗——骨骼肌細胞培養實驗
實驗材料肌組織試劑、試劑盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁儀器、耗材紗布實驗步驟動物胚或幼體的大腿肌組織為最好的培養材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. ?殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3~0.5 厘米小塊；2. ?用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消
懸浮細胞傳代
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從懸浮細胞培養物中吸取樣品，細胞計數，接種適量的懸浮細胞至新培養瓶的新鮮培養基中，使細胞濃度與開始培養時一致。 實驗材料 起始培養物
懸浮細胞傳代
實驗方法原理從懸浮細胞培養物中吸取樣品，細胞計數，接種適量的懸浮細胞至新培養瓶的新鮮培養基中，使細胞濃度與開始培養時一致。實驗材料起始培養物儀器、耗材生長培養基吸管離心管培養瓶攪拌瓶移液器吸耳球吸水紙巾吸管桶抗乙醇記號筆血細胞計數板實驗步驟1. 準備好超凈臺，將試劑及材料放于超凈臺上準備開始實驗。2
細胞轉染實驗的實驗步驟第二次細胞傳代
1） 在轉染后24小時，觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。2） 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞重新放入培養皿中。3） 在正常條件下培養24小時后按照染色要求條件固定。
細胞技術專題：兔膀胱平滑肌細胞培養實驗（一）
兔膀胱平滑肌細胞培養可以：（1）分離得到高純度兔膀胱平滑肌細胞；（2）進行細胞學鑒定研究；（3）用于細胞學其他研究。實驗方法酶分離法 實驗方法原理運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后，完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞，體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下
細胞技術專題：兔膀胱平滑肌細胞培養實驗（三）
?收起? 注意事項1. 應嚴格無菌操作。2. 仔細徹底剝除膀胱黏膜、黏膜下及漿膜層，是確保獲的大量高質單個膀胱平滑肌細胞的基礎。3. 膀胱平滑肌組織應盡量減碎以確保充分消化。4. 嚴格控制膠原酶和胰蛋白酶的濃度和消化時間，見消化液混濁、組織塊呈絮狀，或在倒置顯微鏡下見消化液中有較多單個細胞或細胞小
細胞技術專題：兔膀胱平滑肌細胞培養實驗（二）
二、結果 兩只兔所有標本均獲成功。倒置顯微鏡觀察平滑肌細胞24 小時均可見膀胱平滑肌細胞貼壁生長，正常兔 7 天左右、而梗阻兔則需10~12 天可于50 毫升培養瓶約 80%匯合。均傳代順利，傳代后約正常兔6天左右、而梗阻兔需8~9 天可于50 毫升培養瓶約 80%匯合。本組中均傳至第8 代，經第8
細胞技術專題：人臍動脈平滑肌細胞培養實驗
人臍動脈平滑肌細胞培養可以：（1）獲得人臍動脈平滑肌細胞；（2）作為重大動脈疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）對血管疾病的藥理學和治療繼續提供信息。實驗方法消化法 貼塊法 實驗方法原理運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養，并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。 實
體外抗藥腫瘤細胞模型的建立實驗_細胞培養技術
實驗方法原理體外抗藥腫瘤細胞模型的建立實驗采取長時間藥物處理、誘導抗性，最終篩選出具有一定抗性的細胞克隆。實驗材料小鼠試劑、試劑盒小牛血清DMEMDOX儀器、耗材CO2培養箱無菌鋼圈實驗步驟一、培養條件用含10%小牛血清的DMEM培養液，5%CO2，37℃培養。二、實驗步驟1. ?將CHO細胞培養在