Southern雜交實驗1
[實驗原理] Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病檢測、DNA指紋分析和PCR產物判斷等研究中。但由于該技術的操作比較煩瑣、費時，所以現在有一些其他的方法可以代替Southern 雜交。但該技術也有它的獨特之處，是目前其他方法所不能替代的，如限制性酶切片段的多態性(RFLP)的檢測等。 [實驗操作] 1、基因組DNA的制備（前述） 2、基因組DNA的限制酶切 根據實驗目的決定酶切DNA的量。一般Southern雜交每一個電泳通道需要10-30μg的DNA。購買的限制性內切酶都附有相對應的10倍濃度緩沖液，并可從該公......閱讀全文
Southern雜交電泳凝膠預處理的原理
DNA樣品在制備和電泳過程中始終保持雙鏈結構。為了進行有效地實現Southern印跡轉移，對電泳凝膠做預處理十分必要。分子量超過10kb的較大的DNA片段與較短的小分子量DNA相比，需要更長的轉移時間。所以為了使DNA片段在合理的時間內從凝膠中移動出來，必須將最長的DNA片段控制在大約2kb以下
Southern－Blotting實驗原理、操作步驟和注意事項1
對于大的基因組，DNA酶切圖譜憑肉眼是分辨不開的（EB染色），因為大小不等的分子呈現彌散分布，只有借助靈敏的放射性同位素（或其他化學發光物質），將靶DNA在凝膠上（膜上）的帶型通過特定的探針與之雜交，轉換成X光片上直觀的帶型，才能進行相關分析。另外如果需要鑒定或尋找與已知DNA同源的 DNA片段
基本方案2－直接－Southern－雜交檢測異常擴增和甲基化實驗
實驗材料基因組DNA試劑、試劑盒5 X 限制性緩沖液10 X Ficoll載樣緩沖液1 X TAE 緩沖液變性緩沖液轉性緩沖液中性緩沖液雜交緩沖液儀器、耗材Whatman 3MM 濾紙Nytran SuPercharge Turboblotter Rapid Downward Transfer 系統
Southern雜交電泳凝膠預處理的基本步驟
1. 如果靶序列>5kb，則需進行脫嘌呤處理。 (1) 把凝膠浸在0.25mol/L HCl中，室溫輕輕晃動，直到溴酚藍從藍變黃。 注意：處理人類基因組DNA≤10分鐘；處理植物基因組DNA≤20分鐘。 (2) 把凝膠浸在滅菌雙蒸水中 2. 如果靶序列
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
DNA實驗技術：原位雜交實驗要求及步驟1
原位雜交組織（或細胞）化學 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 簡稱原位雜交（In Situ Hybridization），屬于固相分子雜交的范疇，它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據所用探針和靶核酸的不同
Southern－Blot實驗原理及方法
實驗原理：Southern Blot是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，
核酸蛋白轉移電泳及雜交（Southern－Blot、Northern－Blot和...2
(10)倒去預雜交液，加入含探針的雜交液封口，42℃ 6h或過夜。 (11)取出轉移膜，按以下條件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室溫2×15分鐘 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分鐘，氣中干燥。 (12)將雜交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自顯影2～
分子雜交技術－－1
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
原位雜交組織化學實驗技術1
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
分子生物學里的Northern－Southern雜交的原理
①Southern印跡雜交：用于分析DNA,包括兩個主要過程：一是印跡,即將待測定核酸分子通過一定的方法轉移并結合到一定的固相支持物（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上；二是退火,與固定于膜上的同位素標記的探針進行分子雜交,并進行顯影觀察,這樣即可查找所需DNA的位點.②Northern印跡雜交：將RNA從瓊
Southern－blot實驗方法與步驟
用于檢測重組DNA，也可分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段。用于基因診斷，也可驗證檢測片段的分子量大小。將基因組DNA經限制性內切酶酶切，進行瓊脂糖電泳，把分離后定位在凝膠上的不同分子量的DNA經堿變性處理，將凝膠中變性的DNA轉移至一固相支持濾膜。利用標記的某一DNA、RNA或寡核苷
Southern－印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性
Southern－blot實驗方法與步驟
用于檢測重組DNA，也可分析DNA樣品中是否有與探針序列同源的DNA片段。用于基因診斷，也可驗證檢測片段的分子量大小。將基因組DNA經限制性內切酶酶切，進行瓊脂糖電泳，把分離后定位在凝膠上的不同分子量的DNA經堿變性處理，將凝膠中變性的DNA轉移至一固相支持濾膜。利用標記的某一DNA、RNA或寡核苷
消減雜交實驗
試劑、試劑盒稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材熱循環儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaCl,2
消減雜交實驗
消減雜交實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 稀釋緩沖液 雜交緩沖儲存液 基三乙基溴化銨 礦
消減雜交實驗
試劑、試劑盒 稀釋緩沖液雜交緩沖儲存液基三乙基溴化銨礦物油核酸和寡核苷酸儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑稀釋緩沖液（20 mmol/L HEPES>HCl、pH8.3，50 mmol/LNaCl,0.2 mmol/L EDTA)4X 雜交緩沖儲存液：4mol/L NaC
體細胞雜交的雜交實驗
不同種植物的原生質體可在人工誘導條件下融合，所產生的雜種細胞，即異核體經過培養可再生新壁，分裂形成愈傷組織，進而分化產生雜種植株。由于進行融合的原生質體來自體細胞，故該項技術也叫體細胞雜交。原生質體融合能使有性雜交不親合的植物種間進行廣泛的遺傳重組，因而在農業育種上具有巨大的潛力。在植物遺傳操作研究
Southern－blot實驗方法和操作步驟
第一天 (restriction enzyme digestion)1.取待測的genomic DNA，用二次水稀釋10倍(30μl的DNA 加270μlddH2O→ 300μl)2.換算genomic DNA濃度(OD260)，再換算取10μg所需的體積。3.取10μg DNA，用限制酵素EcoR
Southern－Blot－實驗流程（包括原理/細節）2
）標記探針檢測取標記產物和普通PCR擴增產物各1μl，1.0%的瓊脂糖凝膠電泳。由于大分子量的DIG摻入，標記產物泳動速度比普通PCR產物要慢。所以根據電泳圖就可以判斷是否標記上和有沒有非特異標記！其余標記產物-20℃保存。如果要準確檢測標記效率（一般不必），取標記產物1μl和Dig標記的對照DNA
Southern－印跡實驗——堿性緩沖液法
實驗方法原理用帶正電荷的尼龍膜時，如果用堿性轉移緩沖液，則轉移的DNA可共價結合于膜上。實驗材料DNA試劑、試劑盒NaOHNaCl儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?印跡法中步驟1和歩驟2中所述準備凝膠及用0.25 mol/l HCl處理。2. ?用蒸餾水漂洗凝膠，并用10倍體積的0.4 mol/l N
Southern－Blot－實驗流程（包括原理/細節）3
3）雜交：排盡預雜交液，在8.0ml 新Hyb 高效雜交液（Hyb-100）加入4.0μl 新變性好的探針(1-3ul/膜，5-20ng/ml雜交液)，混勻。65℃雜交儀中雜交過夜（8-15轉/分）。4）雜交完成后，將雜交液回收置于一可耐低溫又可耐沸水浴的管中，貯存于-70℃以備重復使用。重復使用時
雜交實驗的實驗目的
了解用聚乙二醇PEG方法誘異同種植物原生質體融合的技術，并能根據新本原生質體的形態樗來鑒別雜種細胞。
雜交實驗的實驗原理
不同種植物的原生質體可在人工誘導條件下融合，所產生的雜種細胞，即異核體經過培養可再生新壁，分裂形成愈傷組織，進而分化產生雜種植株。由于進行融合的原生質體來自體細胞，故該項技術也叫體細胞雜交。原生質體融合能使有性雜交不親合的植物種間進行廣泛的遺傳重組，因而在農業育種上具有巨大的潛力。在植物遺傳操作研究
Northern雜交試驗指導手冊(1)
一、RNA提取方法一、改良異硫氰酸胍提取法試劑及其配制異硫氰酸胍變性液：貯存液－在含484ml 水（經DEPC處理）, 17.6ml 0.75mol/L檸檬酸鈉（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g異硫氰酸胍，加熱至60~65℃并持續攪拌使之充分溶解。貯存液室溫保存備
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
SOUTHERN－BLOTTING
Materials:Whatman 3 mm Blotting Papernitrocellulose (Schleicher & Schuell, Amersham) or nylon membrane filter (Amersham).Paper towels (preferably C-fo
酵母雙雜交實驗
實驗概要本實驗構建了Bait載體和prey載體，酵母雙雜交后，應用CPRG法定量測試了蛋白質相互作用。實驗步驟1. Bait載體的構建將高保真PCR擴增的OsCCTlb(引物為OsCCT1bEcoRI5'和OsCCTlbXhoI3')和OsCNTlb(引物為OsCNTlb ? Eco