在質粒載體中進行平末端片段的克隆
1．分別設立兩個反應，用適當的限制性內切核酸酶消化1~10μg質粒DNA和外源DNA片段，使它們能產生平末端。2．苯酚：氯仿抽提與乙醇沉淀法純化出已被消化的載體和外源DNA片段。3．分別用TE（pH 8.0）重新溶解純化出的兩種DNA沉淀，使終濃度為100 ng/ml。 假設1 bp相當于660 Da，計算DNA的終濃度（pmol/ml）。4．將載體DNA去磷酸化。5．按下表將適量的DNA轉移至無菌的0.5 ml離心管： 管號 DNA A和E 載體1 [60fmol (~100ng)] B 外源插入片段2[60fmol (~10ng)] C和F 載體1（60fmol）和外源插入片段3（60fmol） D 線狀載體（5’-磷酸化）（60fmol） G 環狀載體[6......閱讀全文
酵母質粒載體的基本信息介紹
酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行復制與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我復制載體兩類。①整合載體：它帶有一個酵母URA3標志基因和大腸桿菌的復制和報告基因。由于質粒DNA與酵母基因組DNA之間發生了同源重組,在轉化的細胞中可以檢測到質粒的整
酵母質粒載體具備的條件有哪些？
一個理想的基因載體應該具有以下幾個基本條件： ①能在宿主細胞進行獨立和穩定的DNA自我復制,并在其DNA中插入外源基因后,仍然保持著穩定的復制狀態和遺傳特性； ②易于從宿主細胞中分離,并進行純化； ③在其DNA序列中,具有適當的限制性內切酶位點(最好是單一酶切位點)。這些位點位于DNA復制
關于黏性質粒載體的基本介紹
由于真核基因的結構與功能研究的需要，人們發展出比λ噬菌體載體具有更大克隆能力的新型的載體——柯斯質粒載體(cosmid vectors，cosmid是COS site—carrying plasmid的縮寫)，也稱為黏陛質粒或黏粒。是基因工程中一個重要的基因表達載體。
pTrcHis2－B載體載體的基本信息和質粒圖譜
pTrcHis2 B載體載體基本信息載體名稱pTrcHis2 B載體抗性Ampicillin載體長度4404 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)拷貝數High copy numberpTrcHis2 B載體質粒圖
LITMUS38i載體載體的基本信息和質粒圖譜
LITMUS38i載體載體基本信息載體名稱LITMUS38i載體抗性Ampicillin載體長度2814 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷貝數High copy number克隆方法Enzym
在質粒載體中進行定向克隆實驗
大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 質粒的克隆位點有 46 個之多，而且還可以設計含有更多克隆位點的多聚接頭（Brosius 1992 ) ]，因此一般來說總是能夠找到一個帶有與某一特定外源 DNA 片段
pDD載體的基本信息和質粒圖譜
pDD載體載體基本信息載體名稱pDD載體抗性Ampicillin載體長度3040 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Clontech拷貝數High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpDD載體質粒圖譜
pUAST載體的基本信息和質粒圖譜
pUAST載體載體基本信息載體名稱pUAST載體抗性Ampicillin載體長度8897 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Brand AH, Perrimon N.拷貝數High copy numberpUAST載體質粒圖譜
pMiniT載體的基本信息和質粒圖譜
pMiniT載體載體基本信息載體名稱pMiniT載體抗性Ampicillin載體長度2525 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源New England Biolabs拷貝數High copy numberpMiniT載體質粒圖譜
BlueScribe載體的基本信息和質粒圖譜
載體基本信息載體名稱BlueScribe載體抗性Ampicillin載體長度2746 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Short JM, Fernandez JM, Sorge JA, Huse WD.拷貝數High copy number啟動子T3克隆方法Enzyme
pRSET－A載體的基本信息和質粒圖譜
pRSET A載體載體基本信息載體名稱pRSET A載體抗性Ampicillin載體長度2897 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)拷貝數High copy numberpRSET A載體質粒圖譜
pBS()載體的基本信息和質粒圖譜
pBS(-)載體載體基本信息載體名稱pBS(-)載體抗性Ampicillin載體長度3204 bp載體類型Basic Cloning Vectors拷貝數High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpBS(-)載體質粒圖譜
質粒克隆載體的設計和構建的原則
①選擇合適的出發質粒出發質粒也叫親本質粒，它應含有質粒克隆載體必備的元件，如復制起始位點、選擇標記基因、克隆位點、啟動子和終止子等。②正確獲得構建質粒克隆載體的元件一般采用限制性核酸內切酶切割出質粒DNA分子，獲得含有某種元件的DNA片段，還可以采用PCR技術從靶DNA中擴增出含某種元件的特異性DN
pInvRecA載體的基本信息和質粒圖譜
pInvRecA載體載體基本信息載體名稱pInvRecA載體抗性Ampicillin載體長度7354 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Sektas M, Gregorowicz M, Szybalski W.拷貝數Low copy numberpInvRecA載體質粒圖
pTrcHis－A載體的基本信息和質粒圖譜
pTrcHis A載體載體基本信息載體名稱pTrcHis A載體抗性Ampicillin載體長度4414 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)拷貝數High copy numberpTrcHis A載體質粒圖譜
pBR322與－pUC質粒載體相比優點
（1）具有更小的分子量和更高的拷貝數如pUC8為2 750bp，pUCl8為2 686bp，控制質粒復制rop基因的缺失，平均每個細胞即可達500～700個拷貝（2）適用于組織化學法檢測重組體通過a-互補作用，利用菌落顏色篩選重組子。（3）具有多克隆位點區段（MCS）可以定向克隆防止載體自我連接。
在質粒載體中進行定向克隆實驗
實驗方法原理 大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 質粒的克隆位點有 46 個之多，而且還可以設計含有更多克隆位點的多聚接頭（Brosius 1992 ) ]，因此一般來說總是能夠找到一個帶有與某一
在質粒載體中進行定向克隆實驗
在質粒載體中進行定向克隆實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司
pBS(+)載體的基本信息和質粒圖譜
pBS(+)載體載體基本信息載體名稱pBS(+)載體抗性Ampicillin載體長度3204 bp載體類型Basic Cloning Vectors拷貝數High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpBS(+)載體質粒圖譜
pTrcHis－C載體的基本信息和質粒圖譜
pTrcHis C載體載體基本信息載體名稱pTrcHis C載體抗性Ampicillin載體長度4412 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)拷貝數High copy numberpTrcHis C載體質粒圖譜
pBC－SK()載體的基本信息和質粒圖譜
pBC SK(-)載體載體基本信息載體名稱pBC SK(-)載體抗性Chloramphenicol載體長度3400 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Agilent Technologies拷貝數High copy number5'引物M13 fwd3'引
pBluescript－SK()載體的基本信息和質粒圖譜
pBluescript SK(-)載體載體基本信息載體名稱pBluescript SK(-)載體抗性Ampicillin載體長度2958 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Short JM, Fernandez JM, Sorge JA, Huse WD.拷貝數High
pBC－SK(+)載體的基本信息和質粒圖譜
pBC SK(+)載體載體基本信息載體名稱pBC SK(+)載體抗性Chloramphenicol載體長度3400 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Agilent Technologies拷貝數High copy number5'引物M13 fwd3'引
pBluescript－KS(+)載體的基本信息和質粒圖譜
pBluescript KS(+)載體載體基本信息載體名稱pBluescript KS(+)載體抗性Ampicillin載體長度2958 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Short JM, Fernandez JM, Sorge JA, Huse WD.拷貝數High
pZErO?2載體的基本信息和質粒圖譜
pZErO?-2載體載體基本信息載體名稱pZErO?-2載體抗性Kanamycin載體長度3297 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Invitrogen (Life Technologies)篩選標記Neomycin/G418(Geneticin)拷貝數High cop
外源DNA和質粒載體的連接反應
外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間 形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交體分子帶有２個單鏈切口，當雜本導
pEXA載體的基本信息和質粒圖譜
pEX-A載體載體基本信息載體名稱pEX-A載體抗性Ampicillin載體長度2450 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Eurofins Genomics拷貝數High copy numberpEX-A載體質粒圖譜
pEZSeq?Kan載體的基本信息和質粒圖譜
pEZSeq?-Kan載體載體基本信息載體名稱pEZSeq?-Kan載體抗性Kanamycin載體長度2008 bp載體類型Basic Cloning Vectors載體來源Lucigen拷貝數High copy numberpEZSeq?-Kan載體質粒圖譜
在質粒載體中進行平末端片段的克隆
在質粒載體中進行平末端片段的克隆1．分別設立兩個反應，用適當的限制性內切核酸酶消化1~10μg質粒DNA和外源DNA片段，使它們能產生平末端。2．苯酚：氯仿抽提與乙醇沉淀法純化出已被消化的載體和外源DNA片段。3．分別用TE（pH 8.0）重新溶解純化出的兩種DNA沉淀，使終濃度為100 ng/ml
在質粒載體中進行平末端片段的克隆
1．分別設立兩個反應，用適當的限制性內切核酸酶消化1~10μg質粒DNA和外源DNA片段，使它們能產生平末端。2．苯酚：氯仿抽提與乙醇沉淀法純化出已被消化的載體和外源DNA片段。3．分別用TE（pH 8.0）重新溶解純化出的兩種DNA沉淀，使終濃度為100 ng/ml。?假設1 bp相當于660 D