NF-κB/Rel轉錄因子家族包含幾種結構相關的蛋白(p65/p105,p52/p100,RelA(p65),c-Rel/ NF-κB)形成同源和/或異源二聚體。該轉錄因子家族成員調控超過150種目的基因,包括炎癥細胞因子、趨化因子、免疫受體、細胞粘附分子等的表達。正因為如此,NF-κB被認為是“免疫應答的中心調節物”。作為二聚體,這些轉錄因子與DNA序列結合(這些結合位點被稱為“κB位點”),從而調節目的基因的表達。在大多數細胞中,NF-κB/Rel轉錄復合物以未活化的形式存在于胞漿中,與抑制劑IκB結合。當細胞受到刺激后,一些列的磷酸化、泛素化反應導致IκB降解,NF-κB轉錄因子進入細胞核。
由于NF-κB轉錄因子在人類炎癥反應和其他疾病中的重要作用,吸引了越來越多研究者的目光,而細胞中NF-κB各亞基活性的檢測是NF-κB研究中必不可少的一步!
怎樣安全、方便、有效的檢測細胞中NF-κB各亞基活性呢?
cayman Chemical公司給出了答案:NF-κB (p65) Transcription Factor Assay Kit(貨號:10007889)及NF-κB (human p50) Transcription Factor Assay Kit(貨號:10006912)。在前期的樣本處理中,還可以使用cayman Chemical細胞核提取試劑盒(Nuclear Extraction Kit,貨號:10009277)。
NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉錄因子分析試劑盒原理:
微孔板預先包被含有NF-κB結合位點的dsDNA寡核苷酸,加入細胞核提取物,使NF-κB蛋白結合到dsDNA上,洗滌除去未結合組分,先后加入NF-κB特異性抗體和HRP標記的二抗。加入酶底物后,通過酶促反應,讀取OD450值來定量樣本中NF-κB的活性。
圖2:NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉錄因子分析試劑盒原理展示
NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉錄因子分析試劑盒特點:
●取代了傳統的凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA),基于ELISA反應原理可實現大量樣本的快速高通量檢測
●在DNA與蛋白質相互作用的水平檢測NF-κB活性,能夠檢測出細胞內真正處于活化狀態的NF-κB
●試劑盒中分別含有NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)轉錄因子陽性對照
●NF-κB(p65)轉錄因子分析試劑盒可檢測人、小鼠及大鼠的NF-κB(p65),不與NF-κB(p50)發生交叉反應;NF-κB(p50)轉錄因子分析試劑盒可檢測人NF-κB(p50),不與NF-κB(p65)發生交叉反應

圖3:NF-κB(p50)/ NF-κB(p65)轉錄因子分析試劑盒結果展示