gⅥ-cDNA融合噬菌體ELISA
[器材和試劑]
通用設備及試劑以及以下的設備和試劑：
● 鏈霉素包被的微量濃度測定板(Pierce)
● T和 2mol/L
● 生物素抗原選擇出的(BAS)噬菌體和(或)免疫親和選擇出的(1AS)噬菌體
● 生物素配體(僅供BAS噬菌體使用)
● 生物素捕獲抗體，誘餌抗血清及預免疫血清(僅供IAS噬菌體使用)辣根過氧化物酶(HRP)/抗M13連接物
● 3，3’，5，5’—四甲基聯苯胺(TMB)底物試劑盒(Pierce)
● 2 mol/L H2S04
[方法]
1．用200ul T沖洗鏈霉素包被的微量濃度測定板的每個孔3次。
2．在2mol/L中稀釋生物素配體(BAS噬菌體—ELISA)或生物素捕獲抗體(ISA噬菌體—ELISA)，直到終濃度為10—50nmol/l，再加100ul這種溶液到農度測定板中的每個孔中。
3．在室溫下孵育濃度測定板1小時。
4。用200ul T沖洗每個孔5次。
5．在2mol/L中稀釋噬菌體溶液到濃度為1×1011TU/ml，在第一次用來稀釋IAS融合噬菌體的2mol/L中加入誘餌血清或預免疫血清，再將100ul這種懸浮液轉移到每個孔中。
6．在室溫下孵育濃度測定板2小時。
7，用200ul T沖洗每個孔5次。
8。加100ul HRP/抗M13連接物(2M稀釋為1：5000)。
9。室溫下孵育濃度測定板l小時。
10．用200ul T沖洗每個孔5次。
11．向每個孔中加100ul TMB底物溶液。
12．室溫下孵育濃度測定板15～30分鐘(或直到顏色發生變化)。
13．用100ul 2 mol/L H2SO4停止反應。
14．在450nm讀吸收值。