釀酒酵母的LiAc／ssDNA／PEG高效轉化法實驗_高效轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 取 10 μl 細胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培養過夜；或者接種 5 ml 的 YPAD 液體培養基，于 30℃ 震蕩培養過夜。2. 將一瓶 YPAD 培養基于 30℃ 平衡過夜。3. 去 50 ml YPAD 培養基加到一個滅菌的 250 ml 的培養瓶中，接種一接種環來源于平板的細胞或 5 ml 液體培養基，混勻，測定 5 倍稀釋后的光密度。4. 于 30℃ 以 200 r/min 振蕩培養，至 10 倍稀釋后 OD600 為 0.2，相當于 2X107 個細胞/ml，需要 3.0~4.5 個小時。該培養物可用于 10 次轉化。5. 用一個滅菌的 50 ml 離心管收獲培養物，3000 g 離心 5 分鐘。6. 倒掉培養基，用 20 ml 滅菌水重懸細胞，再次離心。7. 倒掉水，用 1.0 ml 100 ......閱讀全文
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_高效轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 取 10 μl 細胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培養過夜；或者接種 5 ml 的 YPAD 液體培養基，于 30℃ 震蕩培養過夜。2. 將一瓶 YPAD 培養基于 30℃ 平衡過夜。3. 去 50 m
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
轉化材料的制備 高效轉化法 轉化含有質粒的菌株 快速簡便的轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
轉化材料的制備 高效轉化法 轉化含有質粒的菌株 快速簡便的轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材 磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟 一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化材料的制備
實驗材料DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化含有質粒菌株
實驗材料細胞試劑、試劑盒YPAD儀器、耗材培養瓶SC 減樣選擇培養基實驗步驟1. 在一個 250 ml 的培養瓶中，接種該菌株到 25 ml 相應的 SC 減樣選擇培養基中，200 r/min 培養過夜。2. 檢測每毫升細胞數，按 2.5X108?個細胞計算所需培養物體積。3. 將該體積的培養物加到
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_快速簡便的轉化法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 將 10 μl 接種物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培養過夜。2. 對一個轉化來說，在微量離心管中用 1.0 ml 滅菌水懸浮一接種環酵母菌。3. 離心沉淀細胞，將水去掉。4. 用 500 μl
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_LiAc轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材YEA 平板實驗步驟1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵母菌沉積
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
酵母的高效轉化
酵母的高效轉化1．接種5ml液體YPAD或10ml SC，30℃下振蕩培養過夜。2．計數過夜培養物細胞密度，以最終5×106個/ml的細胞密度接種50ml YPAD培養液。3．置30℃，200r/min振蕩培養至2×107個細胞/ml，通常需要3～5小時，該培養物的細胞足夠供十次轉化用。4．用50m
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_材料的準備
實驗材料高分子量 DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液儀器、耗材微量離心管實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml TE 緩沖液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力攪拌器于 4℃ 攪拌過夜。2. 用大直徑探頭以最大功率超聲處理 30 秒；應將探頭在溶液中持續移動，以保證超聲處理的均一
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_材料的準備
實驗材料高分子量 DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液儀器、耗材微量離心管實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml TE 緩沖液中溶解 1 g 高分子量 DNA，用磁力攪拌器于 4℃ 攪拌過夜。2. 用大直徑探頭以最大功率超聲處理 30 秒；應將探頭在溶液中持續移動，以保證超聲處理的均一
大腸桿菌轉化實驗——高效率電轉化法
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBSOC儀器、耗材電轉化儀離心機分光光度計實驗步驟1. ?接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37℃溫和振搖培養5 h 或過夜。2. ? 將2.5 ml 培養物加人到盛有500 ml LB培養液的2 L 燒瓶中，37℃搖勻振蕩培養至OD600為0.5~0.6。?3.
畢赤酵母高效轉化實驗方案
畢赤酵母高效轉化實驗方案1.收集菌體取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉淀用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。2.菌體處理加入1ml處理液，室溫下放置20min。處理液：10mM LiAc10mM DTT0
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒三梨糖醇儀器、耗材PM 或 YE 培養基實驗步驟1. 用 PM 或 YE 培養基培養細胞，至滴度到每毫升 1X107?個細胞。2. 用冰冷的過濾除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗細胞 3 遍，以降低細胞的導電性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重懸細胞，使滴度
酵母菌落直接質粒轉化法
酵母菌落直接質粒轉化法1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉移到1.5ml的無菌離心管中。2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉化質粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini－prep DNA”方法制得，則不需加載體DNA）。3．加0.5ml PL
酵母轉化實驗
實驗材料酵母菌株質粒儀器、耗材YPD 平板SC-ura平板產孢子平板實驗步驟展開
酵母轉化實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1.? 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2.? 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD
酵母轉化實驗_乙酸鋰轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2. ?轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD培養基，然后
酵母轉化實驗_電穿孔轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒二硫蘇糖醇山梨醇儀器、耗材電穿孔儀器電擊池水浴鍋實驗步驟1. ?實驗前兩天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種于5 ml YPD培養基中，30℃過夜培養至飽和。?2. ?轉化前一天晚上，在裝有500 ml YPD培養基的2 L 無菌燒瓶中接種適量的過夜培養液，于30℃劇烈搖動培養過
LiCl法轉化畢赤酵母菌
實驗概要本實驗介紹了用LiCl法將重組質粒導入畢赤酵母菌X-33的轉化方法。主要試劑甘油，YPD培養基，50% PEG，1 mol/L LiCl，Sac I主要設備搖床，高速離心機，1.5 ml微量離心管，水浴鍋實驗材料重組質粒pPIC6αA-APC，畢赤酵母菌X-33實驗步驟1. 取畢赤酵母甘油種
畢氏酵母氯化鋰轉化法
試劑1M LiCl 50% PEG3350 (氯化鋰轉化法只能PEG3350,不能用PEG8000,PEG3350在北京萊博生物有售,80元/100克)2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸鋰對畢
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——電轉化法
實驗方法原理電轉化法：外加于細胞膜上的電場造成細胞膜的不穩定，形成電穿孔，不僅有利于離子和水進入細菌細胞，也有利于孔DNA等大分子進入。同時DNA在電場中形成的極性對于它運輸進細胞也是非常重要的。實驗材料外源片段與載體的連接產物大腸桿菌感受態細胞試劑、試劑盒X-galAmpLA培養基水抗生素儀器、耗
酵母轉化實驗_原生質體轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG選擇性再生瓊脂儀器、耗材水浴鍋離心機分光光度計培養箱實驗步驟1. ?在實驗前2天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養過夜（如果酵母菌株是溫度敏感的應在低溫下培養）。2. ?轉化前一天晚上，從5 ml 過夜培養
畢赤酵母PEG1000轉化方法
實驗概要本文介紹了畢赤酵母PEG1000轉化方法。據稱PEG比LiCl 方法好，但不如去壁細胞及電轉化法，但對沒有電轉裝置的人來說，更方便，效率為102-103/ugDNA。主要試劑Buffer A：1M山梨醇，10mM bicine(N－二(羥乙基)甘氨酸)pH8.35，3%(v/v)乙二醇Buf
酵母轉化
·?????????Yeast Transformation?(Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation·?????????Yeast Transformation?(Breeden Lab)LiAc method·?????????Large-Scale Y
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——熱激法
質粒的轉化是指將質粒或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。將連接產物轉化到感受態細胞中，實現重組克隆的增殖，便于后續分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）篩選目的細胞。實驗方法原理熱激法：大腸桿菌在0 ℃?CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基－鈣磷酸
酵母表達載體的構建與酵母轉化
實驗概要本實驗介紹了酵母表達載體的構建、酵母轉化方法及酵母抗逆實驗。主要試劑試劑配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris堿，加80 ml ddH2O，濃HCl調pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml