PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（一）
郝麟1） 朱平1）＊ 于曉梅2） 張大成2） 趙新生3） 歐陽賤華3 （1）北京大學第一醫院 北京 100034； 2）北京大學微電子學研究所 北京100871； 3）北京大學化學與分子工程學院 北京100871） 目的: 我們設計一種含有大量微反應池的PCR基因芯片，能對基因的重排，突變和缺失等基因變異進行檢測。PCR基因芯片的關鍵問題是如何檢測出來在微反應池內獲得的極其微量PCR產物。本文應用一些臨床病例的實例標本，觀察能否在基因芯片上進行不同的熒光摻入PCR反應并根據基因芯片上熒光的變化判斷基因的變異。 方法：制作以硅片為材料的PCR基因芯片。利用健康外周血，正常臍血DNA，X連鎖遺傳性鐵粒幼細胞貧（XLSA）家系成員6人外周血DNA做PCR-SSCP，并測序確定。設計檢測此點突變的Taqman探針進行熒光PCR反應，在芯片上進行同樣的......閱讀全文
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究
基因芯片技術具有快速多樣、微型化和自動化等特點在生物醫學領域廣泛的應用。但由于其基本原理是基于核酸雜交技術，有著內在的缺陷，實驗的敏感性和重復性都存在一定問題。核酸雜交較適合于檢測基因的表達，不易檢測基因組DNA的基因的重排，突變和缺失。而大多數腫瘤性疾病和一些遺傳變異和表型的改變與后者有關。為了解
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（五）
3．討論 ?隨著近年基因芯片技術的發展，研究者逐漸認識到基于核酸雜交原理的傳統基因芯片缺陷與應用的局限性。隨著PCR技術的進展，特別是熒光定量PCR技術的出現PCR技術已成為生物醫學領域中應用最廣泛的技術。如果一種基因芯片能直接進行PCR反應,而且能夠同時擴增大批可能發生變異的基因顯然會有廣泛
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（三）
2.2 PCR-SSCP并測序分析發現X連鎖遺傳性鐵幼粒細胞貧血家系ALAS2基因第5外顯子基因異常 分析兩兄弟及其父母、外祖父母的ALAS2基因，兩兄弟ALAS2基因第5外顯子的PCR擴增產物有與正常臍血不同的單鏈電泳條帶，他們的父親和外祖父有與正常臍血相同的單鏈電泳條帶，而他們的母親和外祖母同時
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（四）
2.5 用SYBR Green熒光染料做常規實時定量PCR分析HLA ?應用位點特異性PCR(SCP)方法從20例正常人中確定2位HLAA2（編號1、2）與2位HLA非A2（編號3、4）。 在GeneAmp ?SDS 5700檢測SYBR熒光染料4步位點特異PCR反應（圖4）SYBR熒光染料PCR反
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（二）
1.3.2 ?PCR-SSCP方法分析按照我室常規進行。 1.3.3 ?Taqman熒光探針 以發現的ALAS2基因第五外顯子點突變為中心設計，序列如下： 5’ （熒光集團）FAM-CAAGATCATAGAGAAGAAAC- TAMRA（淬滅集團） 3’，設計Taqman熒光PCR反應的上下
PCR基因芯片上熒光PCR反應的研究（一）
郝麟1） ?朱平1）＊ ?于曉梅2） ?張大成2） ?趙新生3） ? 歐陽賤華3 （1）北京大學第一醫院 北京 100034； 2）北京大學微電子學研究所 北京100871； 3）北京大學化學與分子工程學院 ? ?北京100871） 目的: 我們設計一種含有大量微反應池的PCR基因芯片，能對基因的重
多重PCR基因芯片檢測新研究
來自中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所傳染病診斷室的研究人員建立并初步評價了一種針對重要腸道病原菌的多重PCR基因芯片檢測方法，這一方法具有較高的特異性，并且混合PCR可以分別按照種屬內和種屬間的引物組合方案用于多病原的篩檢。 感染性腹瀉在我國發病率居各類傳染病之首，長期以來嚴重危害人民
多重PCR基因芯片檢測新研究
來自疾病預防控制中心傳染病預防控制所傳染病診斷室的研究人員建立并初步評價了一種針對重要腸道病原菌的多重PCR基因芯片方法，這一方法具有較高的特異性，并且混合PCR可以分別按照種屬內和種屬間的引物組合方案用于多病原的篩檢。 感染性腹瀉在我國發病率居各類傳染病之首，長期以來嚴重危害人民健康。其中絕大
基因測序為何代替不了基因芯片以及PCR？
新一代基因測序技術在最近五年飛速發展，這吸引了不少人的目光，做為精準醫療的基礎，之前市場上的報告都集中關注于基因測序。于是原本紅火的基因芯片技術沉寂了不少。早些 年，有人甚至預言，芯片技術面臨消亡。誠然，在某些方面，新一代測序讓芯片失色，但就 很多應用而言，芯片仍然是不可取代的。 芯片和高通
基因芯片
基因芯片(genechip)（又稱DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的
基因芯片概念
基因芯片（又稱 DNA 芯片、生物芯片）技術就是順應這一科學發展要求的產物，它的出現為解決此類問題提供了光輝的前景。該技術系指將大量（通常每平方厘米點陣密度高于 400 ）探針分子固定于支持物上后與標記的樣品分子進行雜交，通過檢測每個探針分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數量和序列信息。通俗地說，
基因芯片－簡介
隨著人類基因組（測序）計劃（ Human genome project ）的逐步實施以及分子生物學相關學科的迅猛發展，越來越多的動植物、微生物基因組序列得以測定，基因序列數據正在以前所未有的速度迅速增長。然而 , 怎樣去研究如此眾多基因在生命過程中所擔負的功能就成了全世界生命科學工作者共
基因芯片簡介
隨著人類基因組（測序）計劃（Human genome project）的逐步實施以及分子生物學相關學科的迅猛發展，越來越多的動植物、微生物基因組序列得以測定，基因序列數據正在以前所未有的速度迅速增長。然而，怎樣去研究如此眾多基因在生命過程中所擔負的功能就成了全世界生命科學工作者共同的課題。為此，建立
基因芯片－原理
基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，可以基因芯片的測序原理用圖11-5-1來說明。在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與
基因芯片檢測原理
雜交信號的檢測是DNA芯片技術中的重要組成部分。以往的研究中已形成許多種探測分子雜交的方法，如熒光顯微鏡、隱逝波傳感器、光散射表面共振、電化傳感器、化學發光、熒光各向異性等等，但并非每種方法都適用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的結構及性質，需要確定雜交信號在芯片上的位置，尤其是大規模DNA芯片由于
基因芯片的原理
基因芯片（gene chip）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，可以用圖11-5-1來說明。在一塊基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置
基因芯片相關技術
樣品的準備及雜交檢測目前，由于靈敏度所限，多數方法需要在標記和分析前對樣品進行適當程序的擴增，不過也有不少人試圖繞過這一問題，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物特異性強，無交叉污染并且省去了液相處理的煩瑣； Lynx Therapeutics 公司引入
基因芯片主要類型
目前已有多種方法可以將寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。這些方法總體上有兩種，即原位合成（ in situ synthesis ）與合成點樣兩種。支持物有多種如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等，但需經特殊處理。作原位合成的支持物在聚合反應前要先使其表面衍生出羥基或氨基（視所要固定基因芯
什么是基因芯片？
基因芯片（genechip）（又稱DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的
基因芯片的應用
DNA芯片技術就是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可獲得樣品的遺傳信息。是伴隨“人類基因組計劃”的研究進展而快速發展起來的一門高新技術。通俗地說，基因芯片是通過微加工技術，將數以萬計、
基因芯片的應用
1998 年底美國科學促進會將基因芯片技術列為 1998 年度自然科學領域十大進展之一，足見其在科學史上的意義。現在，基因芯片這一時代的寵兒已被應用到生物科學眾多的領域之中。它以其可同時、快速、準確地分析數以千計基因組信息的本領而顯示出了巨大的威力。這些應用主要包括基因表達檢測、突變檢測、基因組多態
基因芯片發展歷史
俄羅斯科學院恩格爾哈得分子生物學研究所和美國阿貢國家實驗室（ANL）的科學家們最早在文獻中提出了用雜交法測定核酸序列（SBH）新技術的想法。當時用的是多聚寡核酸探針。幾乎與此同時英國牛津大學生化系的Sourthern等也取得了在載體固定寡核苷酸及雜交法測序的國際ZL。在這些技術儲備的基礎上，1994
基因芯片的應用
1998 年底 美國科學促進會將基因芯片技術列為 1998 年度自然科學領域十大進展之一，足見其在科學史上的意義。現在，基因芯片這一時代的寵兒已被應用到 生物科學眾多的領域之中。它以其可同時、快速、準確地分析數以千計 基因組信息的本領而顯示出了巨大的威力。這些應用主要包括 基因表達檢測、突變檢測
基因芯片：春天在哪里
俞菁(化名)是一名手語翻譯，她的媽媽因為小時候一次注射慶大霉素致聾，但她自己的聽力得以保持健全。俞菁有一位好姐妹，情況卻正好相反，她媽媽聽力正常，而她自己在小時候在一次藥物注射后變成了聽障患者。 去年，她們都參加了北京市的一個高危人群致聾基因篩查，結果兩個人都是致聾基因的攜帶者，只是因為俞
基因芯片的測序原理
基因芯片的測序原理是雜交測序方法，即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針。當溶液中帶有熒光標記的核酸序列TATGCAATCTAG，與基因芯片上對應位置的核酸探針產生互補匹配時，通過確定熒光強度最強的探針位置，獲得一組序列完全互補的探針序
基因芯片的背景介紹
高通量、全基因組的DNA芯片已經成為生物領域十分有用的工具。然而，芯片實驗產生的數據量日益增長，由于不同的分析方法，會得出不同結論，因而分析起著關鍵作用。 基因芯片分析就是為了通過生物信息學方法從這些芯片數據中發現可能對生物效應起作用的關鍵基因，從中尋找特定模式并對每個基因給予注釋，從而挖掘出
基因芯片的功能介紹
DNA芯片又叫做基因芯片（gene chip）或基因微陣列（microarray），寡核酸芯片，或DNA微陣列，它是通過微陣列技術將高密度DNA片段陣列以一定的排列方式使其附著在玻璃、尼龍等材料上面。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。
基因芯片的主要類型
目前已有多種方法可以將寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。這些方法總體上有兩種，即原位合成（ in situ synthesis ）與合成點樣兩種。支持物有多種如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等，但需經特殊處理。作原位合成的支持物在聚合反應前要先使其表面衍生出羥基或氨基（視所要固定的
基因芯片——生物信息精靈
基因芯片，也叫DNA芯片，是在90年代中期發展出來的高科技產物。基因芯片大小如指甲蓋一般，其基質一般是經過處理后的玻璃片。每個芯片的基面上都可劃分出數萬至數百萬個小區。在指定的小區內，可固定大量具有特定功能、長約20個堿基序列的核酸分子（也叫分子探針）。由于被固定的分子探針在基質上形成不同的探針陣列
基因芯片相關技術介紹
樣品的準備及雜交檢測目前，由于靈敏度所限，多數方法需要在標記和分析前對樣品進行適當程序的擴增，不過也有不少人試圖繞過這一問題，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物特異性強，無交叉污染并且省去了液相處理的煩瑣； Lynx Therapeutics 公司引入的大