斑點ELISA法的操作程序
常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜徹底干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶標抗體，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。⑸顯色 加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時......閱讀全文
斑點ELISA法的操作程序
與常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，
斑點ELISA法的操作程序
常規的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置
斑點ELISA法主要操作程序
⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜徹底干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應提供較大的表面
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為：① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
布ELISA法的操作程序
（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應提供較大的表面
阻斷ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬病（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清；③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清；③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為：① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
阻斷ELISA檢測法操作程序
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干⑤
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于：它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種抗體，還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為：① 加抗體（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體（A
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于：它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種抗體，還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為：① 加抗體（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體（A
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為：① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為：① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→
雙抗體夾心ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加
間接ELISA的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下： ⑴ 材料 ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液； ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清； ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 ⑵ 方
阻斷ELISA的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬病（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
斑點雜交（Dot－blot）法
斑點雜交（Dot blot）是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀（Manifold），如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot（Bio-Rad）和Hybri-Dot,它們有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下
斑點印跡法的技術方法介紹
中文名稱斑點印跡法英文名稱dot blotting定 義將點狀樣品吸印到特定的膜上進行檢測的方法。如用硝酸纖維素膜吸印固體培養基上的菌落或噬斑，在膜上原位裂菌或裂解噬菌體后，與特定的標記探針雜交，從而直接從轉化的DNA文庫或噬菌體文庫中篩選所需要的克隆；將不同稀釋度的蛋白質吸附在膜上進行顯色反應，
ELISA試劑盒實驗操作程序總結
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合elisa試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋
斑點酶聯免疫吸附試驗(DotELISA)
Hawkes等(1982)根據某些固相載體具有較強吸附蛋白質能力的特點，研究建立了斑點酶聯免疫吸附試驗(Dot-ELISA)，目前在醫學及獸醫工作中得以廣泛應用。該試驗以硝酸纖維素薄膜(NC)作固相載體，代替了聚苯乙烯反應板，從而克服了ELISA方法中包被好的酶標板保存運送不便及檢測需儀器等缺點，
薄層色譜法操作程序
1原理：將適宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定。 ?2儀器與設備：玻板（除另有規定外，用5cm×20cm，10cm×20cm，20cm×20cm的規格）、定量毛細管或微量注射器、展開缸。 ?3試液與試劑：固
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA，稱為斑點ELISA（Dot-ELISA）；再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA（C－ELISA）。
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
? 抗體的活性和純度對制備標記抗體至關重要，因為特異性免疫反應隨抗體活性和純度的增加而增強。? 在酶標記過程中，抗體的活性有所降低，故需要純度高、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白，最好使用親和層析提純的抗體，可提高敏感性，而且可稀釋使用，減少非特異性吸附。? 酶與抗體交聯，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
1、直接ELISA試劑盒本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，直接ELISA的操作程序如下：(1) 資料① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液；② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清；待檢鴨血清；③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，
鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA，間接ELISA的操作程序
⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清；③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干③ 加酶標抗體 → 37℃
薄層色譜法斑點拖尾的原因
拖尾現象產生之原因及解決方法：1、點樣量太多，展開劑不能全部負載。解決方法：尋出合適之點樣量后，再進行層析。2、展開劑pH值偏高。如以中性展開劑層析酸性物質時，常形成斑點拖尾。解決方法：在展開劑中加入酸，使解離受到抑制，即可防止斑點拖尾。3、展開劑的pH值偏低。如以中性展開劑層析生物堿和其它弱堿時，